आरटी-पीसीआर आणि पीसीआर समान तंत्र आणि कोरोनाव्हायरस शोध चाचणीचा संदर्भ देतात. पूर्ण नाव रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन पॉलिमरेझ चेन रिॲक्शन चाचणी आहे परंतु बऱ्याचदा फक्त पीसीआर चाचणी म्हणून संक्षिप्त केले जाते.
RT-PCR ही PCR चाचणी सारखीच आहे का?
होय, RT-PCR आणि PCR एकाच चाचणीचा संदर्भ घेतात. RT-PCR चे पूर्ण रूप म्हणजे रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन पॉलिमरेज चेन रिॲक्शन. हे सहसा पीसीआर (पॉलिमरेझ चेन रिॲक्शन) चाचणी म्हणून संक्षिप्त केले जाते.
थोडक्यात स्पष्ट करण्यासाठी, पीसीआर चाचणी व्हायरस, बॅक्टेरिया किंवा इतर सूक्ष्मजीवांमधील अनुवांशिक सामग्री शोधते ज्याला प्रवर्धन म्हणतात. रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन (आरटी) नावाच्या प्रक्रियेद्वारे आरएनए अनुवांशिक सामग्री प्रथम डीएनएमध्ये रूपांतरित केली जाते, म्हणून त्याला आरटी-पीसीआर असेही नाव दिले जाते. मुख्य फायदे हे आहेत की रोगजनक DNA/RNA च्या अगदी लहान प्रमाणात देखील मोजता येण्याजोग्या प्रमाणात वेगाने वाढवता येते.
RT-PCR आणि PCR दोन्ही समान सामान्य कोरोनाव्हायरस शोध चाचणी दर्शवतात जी व्हायरसचा अनुवांशिक कोड शोधून कार्य करते. ही सर्वात अचूक COVID-19 पुष्टीकरण चाचणी आहे. रुग्णाच्या नमुन्यात उपस्थित असल्यास विशिष्ट विषाणू आरएनए अनुक्रमांना लक्ष्य करणारी कार्यपद्धती विषाणूजन्य अनुवांशिक सामग्री वाढवते.
पीसीआर आणि क्यूपीसीआरमध्ये काय फरक आहे?
पीसीआर (पॉलिमरेझ चेन रिॲक्शन) आणि क्यूपीसीआर (परिमाणात्मक पीसीआर) मधील मुख्य फरक आहे:
पीसीआर
- लक्ष्य डीएनए अनुक्रमाची उपस्थिती शोधते
- गुणात्मक चाचणी (डीएनएची उपस्थिती किंवा अनुपस्थिती)
- डीएनएचे प्रमाण ठरवू देत नाही
qPCR
- डीएनए एकाग्रतेचे प्रमाण निश्चित करते
- परिमाणात्मक चाचणी
- अचूक DNA पातळी किंवा जनुक अभिव्यक्ती मोजते
- अधिक संवेदनशील आणि अचूक परिमाण
पीसीआरमध्ये, डीएनए अनुक्रम वेगाने वाढतो जोपर्यंत अभिकर्मक संपत नाही आणि अनुक्रम शोधण्यासाठी गुणात्मक सकारात्मक किंवा नकारात्मक परिणाम मिळतो.
qPCR मध्ये, फ्लोरोसेंट टॅग प्रत्येक प्रतिकृती चक्रादरम्यान डीएनएचे प्रमाणीकरण करण्यास अनुमती देतात. परिणाम म्हणजे अनुक्रम उपस्थितीच्या गुणात्मक सकारात्मकतेऐवजी अचूक एकाग्रता.
पीसीआर आणि क्यूपीसीआर दोन्ही लक्ष्य डीएनए वाढवतात, तर क्यूपीसीआर तंत्र रिअल टाइममध्ये प्रवर्धनाच्या प्रगतीवर लक्ष ठेवते. हे जनुक अभिव्यक्ती विश्लेषण, सूक्ष्मजीव भार शोधणे इत्यादींसाठी अचूक लक्ष्यित डीएनए परिमाण निश्चित करण्यास अनुमती देते आणि अचूक मोजमाप पातळी आवश्यक आहे.
सारांश, दोन्ही DNA गुणाकार करतात परंतु qPCR देखील संख्यात्मक परिणाम आवश्यक असलेल्या विशिष्ट अनुप्रयोगांसाठी उपयुक्त एकाचवेळी संवेदनशील प्रमाणीकरण सक्षम करते.
रिअल-टाइम पीसीआर आणि रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्टेज पीसीआर समान आहे का?
नाही, रिअल-टाइम पीसीआर आणि रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्टेज पीसीआर समान नाहीत. मुख्य फरक आहेत:
रिअल-टाइम पीसीआर :
- डीएनए अनुक्रम वाढवते आणि परिमाणित करते
- डीएनए ही सुरुवातीची अनुवांशिक सामग्री आहे
रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्टेस पीसीआर (RT-PCR) :
- सीडीएनएमध्ये रूपांतरित झाल्यानंतर आरएनए अनुवांशिक सामग्री वाढवते
- आरएनए ही प्रारंभिक अनुवांशिक सामग्री आहे
रिअल-टाइम पीसीआरचा वापर थेट बॅक्टेरिया, विषाणू इत्यादींमधून डीएनए अनुक्रम शोधण्यासाठी आणि त्याचे प्रमाण निश्चित करण्यासाठी केला जातो. रिअल-टाइममध्ये प्रत्येक चक्रात डीएनए प्रवर्धन मोजण्यासाठी ते फ्लोरोसेंट रंगांचा वापर करते.
आरटी-पीसीआर प्रथम रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्टेस एन्झाइम वापरून आरएनएला पूरक डीएनए (सीडीएनए) मध्ये रूपांतरित करते. सीडीएनए नंतर सामान्य पीसीआर प्रमाणे वाढवले जाते. हे आरएनए वाढवून जनुक अभिव्यक्तीचा अभ्यास करण्यासाठी वापरले जाते.
दोन्ही तंत्रे प्रवर्धन आणि प्रमाणीकरणास अनुमती देत असताना, रिअल-टाइम पीसीआर डीएनएसह कार्य करते आणि आरटी-पीसीआर प्रवर्धनापूर्वी आरएनएचे सीडीएनएमध्ये रूपांतर करते.
तर सारांश, मध्यवर्ती फरक म्हणजे रिअल-टाइम पीसीआर डीएनए वाढवते तर आरटी-पीसीआर सीडीएनएमध्ये रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शननंतर आरएनए सीक्वेन्स वाढवते. डीएनए किंवा आरएनएच्या अभ्यासावर आधारित त्यांचे वेगवेगळे अनुप्रयोग आहेत.
RT-PCR च्या पायऱ्या काय आहेत?
रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन पॉलिमरेझ चेन रिॲक्शन (RT-PCR) मध्ये समाविष्ट असलेल्या मुख्य पायऱ्या आहेत:
- आरएनए निष्कर्षण : प्रथम, नमुन्यातून (पेशी, ऊतक इ.) आरएनए काढला जातो आणि शुद्ध केला जातो. चांगल्या दर्जाचा आरएनए महत्त्वाचा आहे.
- रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन : काढलेले आरएनए नंतर रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्टेस नावाच्या एन्झाइमद्वारे पूरक डीएनए (सीडीएनए) मध्ये रूपांतरित केले जाते.
- आरंभिक विकृतीकरण : डबल-स्ट्रॅन्ड डीएनएला सिंगल स्ट्रँडमध्ये वेगळे करण्यासाठी cDNA नमुना गरम केला जातो.
- प्राइमर्ससह पीसीआर प्रवर्धन : पुनरावृत्ती थर्मल सायकलिंग अनुक्रम विशिष्ट प्राइमर्स वापरून लक्ष्य सीडीएनए वाढविण्यात मदत करते.
- अंतिम विस्तार: अभिकर्मक आणि इष्टतम तापमान पुरवून अंतिम वाढवलेला स्ट्रँड पूर्ण केला जातो.
- व्हिज्युअलायझेशन : एम्प्लीफाइड पीसीआर उत्पादने शेवटी ॲग्रोज जेल इलेक्ट्रोफोरेसीसद्वारे परिमाण आणि विश्लेषणापूर्वी पुष्टीकरणासाठी दृश्यमान केली जातात.
तर सारांश, मुख्य टप्पे आहेत:
- आरएनए काढणे
- RNA चे cDNA मध्ये रूपांतर
- लक्ष्य सीडीएनएचे पीसीआर प्रवर्धन
- व्हिज्युअल शोध आणि परिमाण
हे आरटी-पीसीआर तंत्रज्ञानाचा वापर करून प्रथम सीडीएनए म्हणून वाढवून आरएनएच्या अगदी लहान प्रमाणांचा अभ्यास करण्यास अनुमती देते.
प्रत्येक पीसीआर, आरटी-पीसीआर आणि क्यूपीसीआरवर कोणत्या सामान्य चाचण्या केल्या जातात?
PCR, RT-PCR आणि qPCR तंत्रांचा वापर करून केलेल्या काही सामान्य चाचण्या येथे आहेत:
पीसीआर (पॉलिमरेझ चेन रिॲक्शन)
- रोगजनक शोध (जीवाणू, विषाणू)
- अनुवांशिक रोग चाचणी
- डीएनए फिंगरप्रिंटिंग/फॉरेंसिक्स
- अनुवांशिक अनुकूलता चाचणी
- डीएनए बदल शोधणे
आरटी-पीसीआर (रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन पीसीआर)
- जीन अभिव्यक्ती प्रोफाइलिंग
- व्हायरल लोड ओळख
- कर्करोग बायोमार्कर विश्लेषण
- मायक्रोआरएनए विश्लेषण
- व्हायरल इन्फेक्शन्सचे निदान
- आरएनए हस्तक्षेप प्रमाणीकरण
qPCR (परिमाणात्मक पीसीआर)
- व्हायरल लोड परिमाण
- GMO शोध/प्रमाणीकरण
- जनुक अभिव्यक्ती पातळी विश्लेषण
- सूक्ष्मजीव शोध/प्रमाणीकरण
- संख्या भिन्नता विश्लेषण कॉपी करा
- सीडीएनए परिमाण
- बायोमार्कर प्रमाणीकरण
सारांश, प्रवर्धनाचे अंतर्निहित तंत्रज्ञान सारखे असताना, PCR, RT-PCR आणि qPCR वेगवेगळ्या प्रकारच्या गुणात्मक शोध विरुद्ध अचूक परिमाणवाचक विश्लेषण असेस आवश्यकतेनुसार लागू केले जातात.
उच्च संवेदनशीलता DNA/RNA च्या मिनिट ट्रेसना अनेक डोमेनमध्ये सुधारित अचूकता आणि अचूकतेसाठी वेगाने गुणाकार करण्यास अनुमती देते - निदानापासून संशोधनापर्यंत.