PCR, RT-PCR आणि qPCR – प्रकार, फरक आणि उपयोगांचे स्पष्टीकरण
शेअर करा
PCR RT-PCR आणि qPCR
पुण्यातील एखादा डॉक्टर जेव्हा आरटी-पीसीआर (RT-PCR) चाचणी घेण्यास सांगतो – मग ती कोविड-१९, क्षयरोग (ट्युबरक्युलोसिस), हिपॅटायटिस किंवा जनुकीय आजारासाठी असो – तेव्हा रुग्ण अनेकदा विचारतात: ही पीसीआर चाचणीसारखीच आहे का? आरटी-पीसीआर आणि क्यू-पीसीआरमध्ये (qPCR) काय फरक आहे? एक चाचणी फक्त पॉझिटिव्ह किंवा निगेटिव्ह निकाल का देते, तर दुसरी चाचणी व्हायरल लोडची संख्या का सांगते? हे खरोखरच उपयुक्त प्रश्न आहेत, कारण चाचणीमागील तंत्रज्ञान समजून घेतल्यास रुग्णांना त्यांच्या निकालांचा अधिक अचूक अर्थ लावता येतो आणि उपचार करणाऱ्या डॉक्टरांना चांगले प्रश्न विचारता येतात. healthcare nt sickcare येथे, जी २०१७ पासून औंध, पुणे येथे कार्यरत असलेली NABL-पार्टनर निदान सेवा आहे, आम्ही संसर्ग, कर्करोगाचे (कॅन्सर) निदान, जनुकीय आजार आणि पोस्ट-कोविड व्हायरल लोडच्या मूल्यांकनासाठी आरटी-पीसीआर (RT-PCR) आणि क्यू-पीसीआर (qPCR) आधारित चाचण्या करतो. हा लेख पीसीआर, आरटी-पीसीआर आणि क्यू-पीसीआरमधील (qPCR) वास्तविक फरक सोप्या भाषेत स्पष्ट करतो.
आरटी-पीसीआर (RT-PCR) चाचणीचे प्रकार अनेक वैद्यकीय स्थितींमध्ये वापरले जातात - सक्रिय कोविड-१९ आणि क्षयरोगाचे निदान करण्यापासून ते एचपीव्ही (HPV), हिपॅटायटिस बी व्हायरल लोड आणि कर्करोगाच्या जनुकीय बदलांचे (जनुकीय म्यूटेशन्स) निदान करण्यापर्यंत. प्रयोगशाळा कोणती ॲम्प्लीफिकेशन (amplification) पद्धत वापरते याची निवड कोणतीही मनमानी नसते; ती लक्ष्य डीएनए (DNA) आहे की आरएनए (RNA) आहे यावर आणि निकाल गुणात्मक (होय/नाही) किंवा संख्यात्मक (किती) असणे आवश्यक आहे यावर अवलंबून असते.
पीसीआर म्हणजे काय – आणि निदान चाचण्यांमध्ये ते का वापरले जाते?
पीसीआर (पॉलिमरेज चेन रिएक्शन) हे एक प्रयोगशाळा तंत्रज्ञान आहे जे डीएनएच्या विशिष्ट भागाला वेगाने वाढवते, ज्यामुळे क्लिनिकल नमुन्यातील जनुकीय सामग्रीची अगदी सूक्ष्म मात्रा देखील शोधता येते. याचा विकास १९८३ मध्ये कॅरी मुलीस यांनी केला होता आणि आता ते जगभरातील आण्विक निदानाचे (मॉलिक्युलर डायग्नोस्टिक्स) मूळ आहे – ज्यात भारतात केल्या जाणाऱ्या बहुतेक संसर्गजन्य रोगांच्या चाचण्यांचा समावेश आहे.
क्लिनिकल संदर्भात, रुग्णाच्या नमुन्यातील (सामान्यतः रक्त, मूत्र, स्वॅब किंवा ऊतक) बॅक्टेरिया, विषाणू, बुरशी किंवा जनुकीय उत्परिवर्तन (Genetic mutations) शोधण्यासाठी पीसीआर वापरले जाते. पीसीआर डीएनएला काही तासांत लाखो पटीने वाढवते, त्यामुळे पारंपरिक कल्चर (culture) किंवा सूक्ष्मदर्शकाद्वारे (microscopy) ओळखण्यासाठी खूप कमी प्रमाणात उपस्थित असलेले रोगजनक (Pathogens) देखील शोधू शकते. आयसीएमआरने (ICMR) मार्च २०२० पासून भारतात कोविड-१९ साठी आरटी-पीसीआरला (RT-PCR) सुवर्ण मानक पुष्टीकरण चाचणी (gold standard confirmatory test) म्हणून नियुक्त केले, ज्यामुळे ॲन्टीबॉडी (antibody) आधारित रॅपिड टेस्ट्सना प्राथमिक निदान साधन म्हणून बदलले, कारण त्याची संवेदनशीलता (sensitivity) आणि विशिष्टता (specificity) उच्च आहे.
आरटी-पीसीआर (RT-PCR) वि पीसीआर (PCR) – त्या समान चाचण्या आहेत का?
आरटी-पीसीआर (रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन पॉलिमरेज चेन रिएक्शन) आणि पीसीआर या संबंधित परंतु एकसारख्या तंत्रज्ञान नाहीत. मुख्य फरक सुरुवातीच्या जनुकीय सामग्रीमध्ये आहे: मानक पीसीआर डीएनएवर कार्य करते, तर आरटी-पीसीआर आरएनएवर कार्य करते.
SARS-CoV-2, इन्फ्लूएंझा, एचआयव्ही (HIV) आणि हिपॅटायटिस सी (Hepatitis C) यासह अनेक विषाणू त्यांची जनुकीय माहिती डीएनएऐवजी आरएनए (RNA) म्हणून साठवतात. मानक पीसीआर केवळ डीएनए (DNA) वाढवू शकत असल्याने, एक अतिरिक्त पायरी आवश्यक आहे: आरएनए (RNA) प्रथम रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्टेज (reverse transcriptase) नावाच्या एंझाइमचा वापर करून पूरक डीएनए (complementary DNA) (cDNA) मध्ये रूपांतरित केले जाते. या पायरीमुळे आरटी-पीसीआरला (RT-PCR) त्याचे नाव मिळाले आहे. त्यानंतर सीडीएनए (cDNA) मानक पीसीआरद्वारे वाढवले जाते.
भारतातील दैनंदिन क्लिनिकल वापरामध्ये – ज्यात कोविड-१९ चाचणीचा संदर्भ समाविष्ट आहे – "पीसीआर चाचणी" आणि "आरटी-पीसीआर चाचणी" हे शब्द अदलाबदल करून वापरले जातात, ज्यामुळे गोंधळ निर्माण होऊ शकतो. जेव्हा पुण्यातील एखादा डॉक्टर "कोविड पीसीआर चाचणी" घेण्यास सांगतो, तेव्हा प्रयोगशाळा तांत्रिकदृष्ट्या आरटी-पीसीआर (RT-PCR) ॲसे (assay) करते, कारण SARS-CoV-2 एक आरएनए (RNA) विषाणू आहे. सोयीसाठी अनौपचारिकपणे "पीसीआर" हा संक्षिप्त शब्द वापरला जातो, वैज्ञानिक अचूकतेसाठी नाही.
भारतातील कोरोना विषाणू साथीचा रोग आणि त्याच्या प्रकारांवरील आमचा संबंधित लेख महाराष्ट्रात साथीच्या रोगादरम्यान आरटी-पीसीआर (RT-PCR) मोठ्या प्रमाणात कसा वापरला गेला हे स्पष्ट करतो आणि पोस्ट-कोविड रक्त चाचण्यांवरील आमचे मार्गदर्शक आरटी-पीसीआर (RT-PCR) पॉझिटिव्ह संसर्गानंतर पुनर्प्राप्तीनंतर काय चाचणी करावी हे सांगते.
आरटी-पीसीआर (RT-PCR) वि क्यू-पीसीआर (qPCR) – फरक काय आहे?
क्यू-पीसीआर (क्वान्टिटेटिव्ह पीसीआर, ज्याला रियल-टाइम पीसीआर असेही म्हणतात) मानक पीसीआरमध्ये नसलेला मापनाचा आयाम जोडते: ते नमुन्यामध्ये किती लक्ष्य डीएनए किंवा आरएनए (DNA or RNA) उपस्थित आहे, फक्त ते आहे की नाही हे नाही, हे मोजते.
मानक पीसीआरमध्ये, अभिक्रिया अभिकारके (reagents) संपेपर्यंत चालते – अंतिम परिणाम लक्ष्य क्रमाची (target sequence) उपस्थिती किंवा अनुपस्थिती दर्शवणारा जेल बँड (gel band) असतो. क्यू-पीसीआरमध्ये, प्रति ॲम्प्लीफिकेशन (amplification) चक्रात फ्लोरोसंट डाई (fluorescent dye) रेणूंचा समावेश केला जातो आणि रिअल टाइममध्ये मोजले जातात. अधिक डीएनए (DNA) वाढवल्याने फ्लोरोसंट सिग्नल (fluorescent signal) प्रमाणात वाढतो, ज्यामुळे सॉफ्टवेअरला लक्ष्य डीएनए (DNA) किंवा आरएनएची (RNA) अचूक प्रारंभिक एकाग्रता (concentration) मोजता येते.
| वैशिष्ट्य | PCR | RT-PCR | qPCR (रिअल-टाइम पीसीआर) |
|---|---|---|---|
| सुरुवातीची सामग्री | डीएनए (DNA) | आरएनए (RNA) (सीडीएनएमध्ये रूपांतरित) | डीएनए (DNA) किंवा सीडीएनए (cDNA) (आरएनए प्रथम रूपांतरित) |
| निकालाचा प्रकार | गुणात्मक (सकारात्मक / नकारात्मक) | गुणात्मक किंवा संख्यात्मक | संख्यात्मक (अचूक कॉपी संख्या) |
| शोधण्याची पद्धत | जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस (Gel electrophoresis) | जेल (Gel) किंवा फ्लोरोसन्स (fluorescence) | फ्लोरोसंट डाई (Fluorescent dye) – रिअल-टाइम |
| वेग | अनेक तास | अनेक तास | जलद – ॲम्प्लीफिकेशनदरम्यान (amplification) निकाल |
| संवेदनशीलता | उच्च | खूप उच्च | परिमाणासह खूप उच्च |
| सामान्य क्लिनिकल वापर | बॅक्टेरियाचा डीएनए (DNA), जनुकीय उत्परिवर्तन (genetic mutations) | कोविड-१९, टीबी, एचआयव्ही, हिपॅटायटिस | एचआयव्ही व्हायरल लोड, एचबीव्ही लोड, कर्करोगाची जीन्स |
आरटी-पीसीआर (RT-PCR) वि रिअल-टाइम पीसीआर (Real-Time PCR) – त्या सारख्याच आहेत का?
नाही – आरटी-पीसीआर आणि रिअल-टाइम पीसीआर एकसारख्या नाहीत, जरी हे शब्द सामान्यतः गोंधळात टाकतात. आरटी-पीसीआर म्हणजे ॲम्प्लीफिकेशन करण्यापूर्वी आरएनएला सीडीएनएमध्ये रूपांतरित करण्यासाठी रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्टेजचा (reverse transcriptase) वापर करणे – हे सुरुवातीच्या सामग्रीचे वर्णन करते. रिअल-टाइम पीसीआर (ज्याला क्यू-पीसीआर (qPCR) असेही म्हणतात) मापन पद्धतीचा संदर्भ देते – प्रत्येक ॲम्प्लीफिकेशन सायकल दरम्यान डीएनएचे प्रमाण मोजण्याची क्षमता, शेवटी नाही. हे दोन्ही एकत्र केले जाऊ शकतात: जेव्हा आरटी-पीसीआर रिअल टाइममध्ये फ्लोरोसंट प्रमाणीकरणासह (fluorescent quantification) केले जाते, तेव्हा त्याला क्यूआरटी-पीसीआर (qRT-PCR) किंवा रिअल-टाइम आरटी-पीसीआर म्हणतात.
आयसीएमआर (ICMR) मंजूर प्रयोगशाळांद्वारे भारतात अधिकृतपणे वापरली जाणारी कोविड-१९ चाचणी तांत्रिकदृष्ट्या रिअल-टाइम आरटी-पीसीआर (Real-Time RT-PCR) ॲसे (assay) आहे – याचा अर्थ ती रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन (आरएनए (RNA) विषाणू हाताळण्यासाठी) आणि रिअल-टाइम फ्लोरोसंट डिटेक्शन (संवेदनशीलता (sensitivity) आणि वेगासाठी) वापरते. हा फरक महत्त्वाचा आहे कारण तो स्पष्ट करतो की कोविड-१९ पीसीआर (PCR) निकाल जलद आणि सायकल थ्रेशोल्ड (Ct) मूल्याने (व्हयरल लोडच्या व्यस्त प्रमाणात विषाणू शोधण्यासाठी किती ॲम्प्लीफिकेशन सायकल लागल्या हे दर्शवणारी संख्या) का येतात.
भारतात पीसीआर (PCR), आरटी-पीसीआर (RT-PCR) आणि क्यू-पीसीआर (qPCR) वापरून कोणत्या चाचण्या केल्या जातात?
कोणत्या क्लिनिकल चाचणीसाठी कोणते तंत्रज्ञान वापरले जाते हे समजून घेतल्याने रुग्णांना कधी आणि का चाचणी करावी याबद्दल माहितीपूर्ण निर्णय घेण्यास मदत होते. पुण्यातील NABL-पार्टनर प्रयोगशाळांमध्ये खालील चाचण्या पीसीआर-आधारित ॲम्प्लीफिकेशन (PCR-based amplification) वापरतात:
मानक पीसीआर (DNA डिटेक्शन) वापरणाऱ्या चाचण्या
- टीबी पीसीआर (TB PCR) / जीनएक्सपर्ट (GeneXpert) — मायकोबॅक्टेरियम ट्यूबरक्युलोसिस (Mycobacterium tuberculosis) डीएनए (DNA) आणि रिफाम्पिसिन प्रतिरोध (rifampicin resistance) शोधते. आमची जीनएक्सपर्ट चाचणी आणि टीबी पीसीआर गुणात्मक चाचणी घरी नमुना संकलनासह उपलब्ध आहेत.
- एचपीव्ही (HPV) पीसीआर आणि टायपिंग (typing) — डीएनए (DNA) विश्लेषणाद्वारे उच्च-जोखीम आणि कमी-जोखीम एचपीव्ही (HPV) स्ट्रेन्स (strains) शोधते.
- एचएलए-बी२७ (HLA-B27) पीसीआर (PCR) — ॲंकिलोजिंग स्पॉन्डिलायटिस (ankylosing spondylitis) आणि प्रतिक्रियाशील संधिवात (reactive arthritis) साठी जनुकीय चाचणी.
- एमटीएचएफआर (MTHFR) उत्परिवर्तन पीसीआर (mutation PCR) — रक्ताच्या गुठळ्या होण्याच्या (clotting) जोखमीसाठी जनुकीय थ्रोम्बोफिलिया (thrombophilia) चाचणी.
- फॅक्टर व्ही लाइडन उत्परिवर्तन (Factor V Leiden mutation) — आनुवंशिक रक्त गोठण्याच्या विकारासाठी पीसीआर-आधारित जनुकीय चाचणी.
आरटी-पीसीआर (RNA डिटेक्शन) वापरणाऱ्या चाचण्या
- कोविड-१९ आरटी-पीसीआर (COVID-19 RT-PCR) — SARS-CoV-2 साठी सुवर्ण मानक पुष्टीकरण चाचणी
- एचआयव्ही आरएनए पीसीआर (HIV RNA PCR) (एचआयव्ही व्हायरल लोड) — व्हायरल आरएनए (viral RNA) मोजून एचआयव्ही (HIV) रुग्णांमधील उपचारांचा प्रतिसाद तपासतो
- डेंग्यू आरटी-पीसीआर (Dengue RT-PCR) — ॲन्टीबॉडीज (antibodies) विकसित होण्यापूर्वी ताप असताना लवकर पुष्टीकरण
- इन्फ्लूएंझा ए/बी आणि एच३एन२ आरटी-पीसीआर (Influenza A/B and H3N2 RT-PCR) — लक्ष्यित उपचारांसाठी हंगामी फ्लू स्ट्रेन्समध्ये फरक करतो
- हिपॅटायटिस सी (HCV) आरएनए (RNA) डिटेक्शन — सक्रिय एचसीव्ही (HCV) संसर्गाची पुष्टी करतो आणि उपचार सुरू करण्यास मार्गदर्शन करतो
क्यु-पीसीआर (qPCR) किंवा रिअल-टाइम आरटी-पीसीआर (Real-Time RT-PCR) (संख्यात्मक) वापरणाऱ्या चाचण्या
- एचआयव्ही (HIV) व्हायरल लोड — अँटीरेट्रोव्हायरल उपचारांची (antiretroviral treatment) परिणामकारकता तपासण्यासाठी प्रति मिली आरएनए (RNA) प्रतींची संख्या मोजते
- हिपॅटायटिस बी व्हायरल लोड (एचबीव्ही (HBV) डीएनए (DNA) क्यू-पीसीआर (qPCR)) — अँटीव्हायरल थेरपी (antiviral therapy) आणि यकृताच्या नुकसानीच्या (liver damage) जोखमीचे निरीक्षण करण्यासाठी एचबीव्ही (HBV) डीएनएचे (DNA) प्रमाण मोजते
- बीसीआर-एबीएल (BCR-ABL) संख्यात्मक पीसीआर (quantitative PCR) — फ्यूजन जीन (fusion gene) अभिव्यक्ती मोजून क्रॉनिक मायलोइड ल्यूकेमियाच्या (Chronic myeloid leukaemia) (सीएनल) उपचारांच्या प्रतिसादाचे निरीक्षण करते
- सीएमव्ही (CMV) आणि ईबीव्ही (EBV) व्हायरल लोड — रोगप्रतिकारशक्ती कमी असलेल्या (immunocompromised) रुग्णांमध्ये व्हायरल भार (viral burden) मोजते
- कोविड-१९ (COVID-19) सीटी (Ct) मूल्याचे स्पष्टीकरण — प्रत्येक कोविड-१९ (COVID-19) पीसीआर (PCR) चाचणीमध्ये नमूद केलेले सीटी (Ct) मूल्य हे क्यू-पीसीआर (qPCR) आउटपुट (output) आहे; कमी सीटी (Ct) म्हणजे जास्त व्हायरल लोड (viral load)
पुण्यात पोस्ट आणि प्री-कोविड चाचणी पॅकेजेस बुक करा
healthcare nt sickcare पोस्ट कोविड आणि प्री कोविड रक्त चाचण्या घरी नमुना संकलन आणि थेट वॉक-इन सुविधेसह देते.
आरटी-पीसीआर (RT-PCR) चे टप्पे – चाचणी प्रत्यक्षात कशी कार्य करते
आरटी-पीसीआर प्रक्रियेमध्ये आरएनए (RNA) काढण्यापासून ते निकाल तयार करण्यापर्यंत चार मुख्य अनुक्रमिक टप्पे असतात. हे टप्पे समजून घेतल्याने रुग्णांना चाचणीला अनेक तास का लागतात आणि नमुन्याची गुणवत्ता (sample quality) का महत्त्वाची आहे हे समजण्यास मदत होते.
पायरी 1 — आरएनए (RNA) निष्कर्षण: रुग्णाच्या नमुन्यावर (नाकातील स्वॅब, रक्त किंवा इतर ऊतक) पेशी फोडण्यासाठी आणि आरएनए (RNA) बाहेर काढण्यासाठी रासायनिक अभिकारकांद्वारे प्रक्रिया केली जाते. हे काढलेले आरएनए शुद्ध आणि अखंड असले पाहिजे – म्हणूनच नमुने संकलनापासून प्रयोगशाळेत पोहोचेपर्यंत योग्यरित्या हाताळले पाहिजेत.
पायरी २ — रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन: काढलेले आरएनए रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्टेज एंझाइमसह इनक्यूबेट (incubate) केले जाते, जे आरएनए टेम्पलेट वाचते आणि पूरक डीएनए (cDNA) स्ट्रँड संश्लेषित करते. हे व्हायरल (viral) किंवा सेल्युलर (cellular) आरएनएला अधिक स्थिर डीएनए (DNA) स्वरूपात रूपांतरित करते जे पीसीआर (PCR) ॲम्प्लीफिकेशनमधून (amplification) जाऊ शकते.
पायरी 3 — पीसीआर ॲम्प्लीफिकेशन (PCR Amplification): सीडीएनए (cDNA) प्राईमर्ससह (primers) एकत्र केले जाते – लहान सिंथेटिक डीएनए (DNA) अनुक्रम जे लक्ष्य जीन (target gene) क्षेत्राशी विशेषतः जोडले जातात – आणि डीएनए (DNA) पॉलिमरेज एंझाइम. मिश्रण वारंवार थर्मल सायकलिंगमधून (thermal cycling) जाते: डीएनए (DNA) स्ट्रँड (strands) डिनॅचर (denature) (वेगळे करण्यासाठी) गरम करणे, प्राईमर (primer) जोडणीसाठी थंड करणे आणि नवीन डीएनए (DNA) संश्लेषणासाठी गरम करणे. प्रत्येक सायकल लक्ष्य डीएनए (DNA) प्रतींची संख्या दुप्पट करते. ३०-४५ सायकल नंतर, एका मूळ रेणूतून अब्जावधी प्रती तयार होतात.
पायरी ४ — शोध आणि निकाल: गुणात्मक आरटी-पीसीआरमध्ये, वाढवलेले डीएनए उत्पादने अग्रोज जेलवर (agarose gel) चालवले जातात – बँडची उपस्थिती लक्ष्याची पुष्टी करते. रिअल-टाइम आरटी-पीसीआरमध्ये (COVID-19 साठी वापरले जाते), प्रत्येक सायकलमध्ये फ्लोरोसंट सिग्नल (fluorescent signal) मोजला जातो, ज्यामध्ये सीटी (Ct) मूल्य (value) सिग्नलने शोध थ्रेशोल्ड (detection threshold) ओलांडल्याचे सायकल दर्शवते. आयसीएमआर (ICMR) मार्गदर्शक तत्त्वांनुसार ३५ पेक्षा कमी सीटी (Ct) मूल्य (value) सामान्यतः कोविड-१९ साठी सकारात्मक म्हणून नोंदवले जाते.
पहा: कोविड-१९ चाचणी आणि मॉलिक्युलर डायग्नोस्टिक्स
लोक पीसीआर (PCR), आरटी-पीसीआर (RT-PCR) आणि क्यू-पीसीआर (qPCR) बद्दल देखील विचारतात
सामान्य क्लिनिकल वापरामध्ये, "पीसीआर चाचणी" आणि "आरटी-पीसीआर चाचणी" हे शब्द कोविड-१९ चाचणीचा संदर्भ देताना अदलाबदल करून वापरले जातात. ते एकाच प्रयोगशाळा ॲसेचा (assay) संदर्भ देतात. तांत्रिकदृष्ट्या, कोविड-१९ चाचणी ही रिअल-टाइम आरटी-पीसीआर आहे – ती रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन (कारण SARS-CoV-2 एक आरएनए (RNA) विषाणू आहे) आणि रिअल-टाइम फ्लोरोसंट डिटेक्शन (real-time fluorescent detection) वापरते. जेव्हा पुण्यातील तुमचा डॉक्टर तुम्हाला "कोविड पीसीआर चाचणी" साठी पाठवतो, तेव्हा प्रयोगशाळा आरटी-पीसीआर (RT-PCR) करते. तुमच्या अहवालावर छापलेले सीटी (Ct) मूल्य (value) हे ॲसेच्या (assay) रिअल-टाइम घटकाचे संख्यात्मक आउटपुट (output) आहे.
आरटी-पीसीआर (RT-PCR) निकालातील सीटी (Ct) (सायकल थ्रेशोल्ड) मूल्य (value) म्हणजे परिभाषित सिग्नल थ्रेशोल्डपेक्षा (signal threshold) लक्ष्य व्हायरल आरएनए (viral RNA) शोधण्यासाठी आवश्यक असलेल्या ॲम्प्लीफिकेशन (amplification) सायकलची संख्या. कमी सीटी (Ct) मूल्य – सामान्यतः २० पेक्षा कमी – म्हणजे ॲम्प्लीफिकेशन प्रक्रियेच्या सुरुवातीलाच विषाणू शोधला गेला, जो रुग्णाच्या नमुन्यामध्ये उच्च व्हायरल लोड (viral load) दर्शवतो. उच्च सीटी (Ct) मूल्य – ३० ते ३५ दरम्यान – म्हणजे अनेक सायकल नंतरच विषाणू शोधला गेला, जो कमी व्हायरल लोड (viral load) दर्शवतो. आयसीएमआर (ICMR) मार्गदर्शक तत्त्वांनुसार ३५ पेक्षा कमी सीटी (Ct) मूल्य (value) हे सकारात्मक कोविड-१९ (COVID-19) निकाल मानले जाते. वैद्यकीयदृष्ट्या, सीटी (Ct) मूल्ये डॉक्टरांना रोगाची तीव्रता आणि संसर्ग कालावधीचे मूल्यांकन करण्यास मदत करतात, जरी त्यांचे नेहमी लक्षणे आणि क्लिनिकल प्रेझेंटेशनच्या संदर्भात स्पष्टीकरण केले पाहिजे.
क्यूआरटी-पीसीआर (qRT-PCR) (क्वान्टिटेटिव्ह रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन पीसीआर) रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शनला रिअल-टाइम संख्यात्मक शोध (real-time quantitative detection) सह एकत्र करते. हे मूलतः रिअल-टाइम पीसीआर उपकरणावर फ्लोरोसंट डिटेक्शनसह (fluorescent detection) केलेले आरटी-पीसीआर (RT-PCR) आहे – ज्यामुळे आरएनए-टू-सीडीएनए (RNA-to-cDNA) रूपांतरण आणि प्रमाणीकरण दोन्ही एकाच, सततच्या प्रक्रियेत होते. मानक आरटी-पीसीआर (RT-PCR) आरएनएची (RNA) उपस्थिती गुणात्मकपणे (सकारात्मक किंवा नकारात्मक) शोधते; क्यूआरटी-पीसीआर (qRT-PCR) मूळ नमुन्यामध्ये किती आरएनए (RNA) उपस्थित होता हे मोजते, जे प्रति मिली (mL) प्रती किंवा सीटी (Ct) मूल्य (value) म्हणून व्यक्त केले जाते. एचआयव्ही (HIV) व्हायरल लोड (viral load) चाचणी हे क्यूआरटी-पीसीआरचे (qRT-PCR) एक सामान्य उदाहरण आहे – ते डॉक्टरांना केवळ एचआयव्ही (HIV) आरएनए (RNA) उपस्थित आहे की नाही हेच सांगत नाही, तर रक्तामध्ये नेमक्या किती प्रती फिरत आहेत हे देखील सांगते, जे थेट उपचारांच्या निर्णयांना मार्गदर्शन करते.
भारतात आरटी-पीसीआर (RT-PCR) चा वापर अनेक संसर्गजन्य आणि जनुकीय (genetic) परिस्थितींचे निदान करण्यासाठी केला जातो. सर्वात सामान्य क्लिनिकल उपयोगांमध्ये हे समाविष्ट आहे: कोविड-१९ (SARS-CoV-2 आरएनए (RNA) शोध); एचआयव्ही (HIV) संसर्ग आणि व्हायरल लोड (viral load) निरीक्षण; क्षयरोग (GeneXpert टीबी पीसीआर, जो मायकोबॅक्टेरियम ट्यूबरक्युलोसिस डीएनए (Mycobacterium tuberculosis DNA) शोधतो); हिपॅटायटिस सी (एचसीव्ही (HCV) आरएनए (RNA) पुष्टीकरण आणि व्हायरल लोड); डेंग्यू ताप (ॲन्टीबॉडीज (antibodies) विकसित होण्यापूर्वी लवकर निदान); इन्फ्लूएंझा ए, बी, आणि एच३एन२ (H3N2) सबटायपिंग (subtyping); चिकनगुनिया; लेप्टोस्पायरोसिस; आणि डांग्या खोकला (बोर्डेटेला पर्ट्युसिस). ऑन्कोलॉजीमध्ये (oncology), आरटी-पीसीआरचा (RT-PCR) वापर क्रॉनिक मायलोइड ल्यूकेमिया (बीसीआर-एबीएल (BCR-ABL)) आणि विशिष्ट स्तन कर्करोगाच्या (breast cancer) उपप्रकारांसह कर्करोगामध्ये जीन (gene) अभिव्यक्ती बायोमार्कर (biomarker) शोधण्यासाठी केला जातो. कोरोना विषाणू संसर्गाच्या दीर्घकाळ चालणाऱ्या परिणामांवरील आमचे मार्गदर्शक आरटी-पीसीआर (RT-PCR) निकाल – विशेषतः सीटी (Ct) मूल्ये (values) – पोस्ट-कोविड निरीक्षणाच्या निर्णयांवर कसा प्रभाव टाकतात यावर चर्चा करते.
लॅबोरेटरीच्या कार्यपद्धतीनुसार, नमुन्यांच्या आकारानुसार आणि चाचणी तातडीची आहे की नियमित आहे यावर अवलंबून, प्रमाणित RT-PCR चाचणीचा अहवाल नमुना मिळाल्यापासून 4 ते 8 तासांत मिळतो. वास्तविक आण्विक प्रक्रिया — RNA निष्कर्षण (extraction), रिव्हर्स ट्रान्स्क्रिप्शन (reverse transcription), आणि PCR एम्प्लिफिकेशन (amplification) — अंदाजे 2-3 तास घेते. प्रशासकीय प्रक्रिया, गुणवत्ता तपासणी आणि अहवाल तयार करणे यासाठी अतिरिक्त वेळ लागतो. पुणे येथील NABL-भागीदार लॅबोरेटरीजमध्ये COVID-19 RT-PCR चाचण्यांचे अहवाल नमुना घेतल्यापासून साधारणतः 6-24 तासांच्या आत दिले जातात. healthcare nt sickcare मध्ये, RT-PCR आधारित चाचण्यांसाठी औंध, बाणेर, वाकड, कोथरूड, हडपसर आणि पुणे व पिंपरी-चिंचवडच्या आसपासच्या भागांमध्ये घरपोच नमुना संकलनाची सुविधा उपलब्ध आहे आणि नोंदणीकृत ईमेलवर डिजिटल अहवाल पाठवले जातात.
healthcare nt sickcare, पुणे, महाराष्ट्र, भारत
योग्य पॅथॉलॉजी प्रयोगशाळा निवडणे सोपे असावे. पुणे रहिवाशांसाठी डिझाइन केलेले विश्वसनीय रक्त चाचणी आणि प्रतिबंधात्मक आरोग्य तपासणी पॅकेजेस एक्सप्लोर करा.
अस्वीकरण
हा लेख केवळ सामान्य आरोग्य जागरूकता आणि शैक्षणिक उद्देशांसाठी आहे. हे वैद्यकीय सल्ला किंवा पात्र व्यावसायिकाकडून मिळालेल्या प्रयोगशाळा किंवा क्लिनिकल मार्गदर्शनाचा पर्याय नाही. RT-PCR आणि qPCR चाचणी प्रोटोकॉल, अहवाल अर्थबोधन आणि क्लिनिकल ॲप्लिकेशन प्रयोगशाळा आणि परिस्थितीनुसार भिन्न असू शकतात — तुमच्या चाचणी परिणामांसाठी विशिष्ट मार्गदर्शनासाठी नेहमी तुमच्या उपचार करणाऱ्या डॉक्टरांचा सल्ला घ्या. पूर्ण वापराच्या अटींसाठी, आमच्या अस्वीकरण धोरणाचा संदर्भ घ्या. सर्व सामग्री कॉपीराइट healthcare nt sickcare. अनधिकृत पुनरुत्पादन सक्त मनाई आहे. © healthcare nt sickcare आणि healthcarentsickcare.com, 2017–सध्या.