एलिसा परीक्षण कैसे काम करता है? एक बहुमुखी इम्यूनोपरख
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एलिसा (एंजाइम-लिंक्ड इम्युनोसॉरबेंट परख) एक अपरिहार्य प्रयोगशाला परीक्षण है जिसका उपयोग निदान और अनुसंधान अनुप्रयोगों की एक विस्तृत श्रृंखला के लिए एंटीबॉडी, एंटीजन, प्रोटीन और अन्य पदार्थों का पता लगाने के लिए किया जाता है।
एलिसा परीक्षण कैसे काम करता है?
एलिसा लक्षित विश्लेषणों की पहचान करने के लिए इम्यूनोएसे सिद्धांतों का लाभ उठाता है:
- कैप्चर एंटीबॉडीज़ के साथ सतह की कोटिंग : एलिसा प्लेट की सतह को मापे जा रहे पदार्थ के लिए विशिष्ट एंटीबॉडीज़ के साथ लेपित किया जाता है। यह मिलान करने वाले विश्लेषणों को "कैप्चर" करता है।
- ब्लॉकिंग साइटें : बाद में गैर-विशिष्ट बंधन को रोकने के लिए ब्लॉकिंग प्रोटीन प्लेट पर किसी भी खुली जगह से जुड़ जाते हैं।
- द्रव के नमूने जोड़ना : रोगी के सीरम, मूत्र, लार या विश्लेषण युक्त अन्य तरल पदार्थ मिलाए जाते हैं, ताकि वे कैप्चर किए गए एंटीबॉडी से बंध सकें।
- धुलाई : धोने से अनबाउंड घटक निकल जाते हैं, प्लेट पर केवल कैप्चर किए गए एनालिटिक्स रह जाते हैं।
- डिटेक्टिंग एंटीबॉडीज़ को जोड़ना : एंजाइमों के साथ मिलकर एंटीबॉडीज़ को जोड़ा जाता है जो बाध्य एनालिटिक्स से जुड़ते हैं। उपयोग किए जाने वाले सामान्य एंजाइम हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज (एचआरपी) या क्षारीय फॉस्फेट (एपी) हैं।
- सब्सट्रेट समाधान : जब सब्सट्रेट जोड़ा जाता है, तो युग्मित एंजाइमों के साथ प्रतिक्रियाएं मापने योग्य रंग परिवर्तन या उपस्थित विश्लेषण की एकाग्रता के अनुपात में प्रतिदीप्ति उत्पन्न करती हैं।
- प्रतिक्रिया को रोकना : रंग की तीव्रता या प्रतिदीप्ति के आधार पर परिमाणीकरण की अनुमति देने के लिए एक रोक समाधान प्रतिक्रिया को रोक देता है।
एलिसा टेस्ट के प्रकार
विशिष्ट विश्लेषणों के लिए विभिन्न नमूनों का परीक्षण करने के लिए कई एलिसा वेरिएंट डिज़ाइन किए गए हैं:
- प्रत्यक्ष एलिसा (एंटीजन का पता लगाता है) : कैप्चर एंटीबॉडी नमूने में एंटीजन को बांधता है। एंटीबॉडी का पता लगाना एंटीजन को भी बांधता है। एंजाइम प्रतिक्रिया उपस्थिति का संकेत देती है।
- अप्रत्यक्ष एलिसा (एंटीबॉडी का पता लगाता है) : एंटीजन सतह पर लेपित होता है। यदि नमूने में एंटीबॉडी मौजूद हैं, तो वे एंटीजन को बांध देते हैं। एंजाइम के साथ एक अतिरिक्त माध्यमिक एंटीबॉडी नमूना एंटीबॉडी को बांधता है, जो उपस्थिति का संकेत देता है।
- सैंडविच एलिसा (एंटीजन का पता लगाता है) : सतह पर एक कैप्चर एंटीबॉडी होती है। नमूना एंटीजन कैप्चर एंटीबॉडी को बांधता है। एंटीबॉडी का पता लगाना एंटीजन को भी बांधता है, जिससे एंजाइम सब्सट्रेट पर कार्य कर सकते हैं।
- प्रतिस्पर्धी एलिसा (छोटे एंटीजन/हैप्टेंस) : नमूना एंटीजन और लेबल एंटीजन दोनों एक प्लेट पर लेपित एंटीबॉडी पर बाध्यकारी साइटों के लिए प्रतिस्पर्धा करते हैं। नमूने में अधिक एंटीजन = कम लेबल वाला एंटीजन बाइंडिंग और कमजोर सिग्नल।
एलिसा परीक्षण के लाभ
- किसी नमूने के भीतर पता लगाने के लिए अत्यधिक विशिष्ट और संवेदनशील। विश्लेषणात्मक एकाग्रता की मात्रा निर्धारित कर सकते हैं।
- एकाधिक नमूनों के उच्च थ्रूपुट स्वचालित विश्लेषण के लिए उत्तरदायी।
- अन्य एंटीबॉडी पता लगाने के तरीकों की तुलना में अपेक्षाकृत सस्ता।
- ठीक से विकसित होने पर प्रयोगशालाओं में परिणामों के मानकीकरण की अनुमति मिलती है।
- बहुमुखी: कई जैव अणुओं, रोगजनकों, दवाओं, एलर्जी आदि का पता लगा सकता है और उनका विश्लेषण कर सकता है।
- नमूने कई दिनों तक स्थिर रहते हैं, जिससे अन्य तीव्र इम्यूनोडायग्नोस्टिक्स के विपरीत, बैच विश्लेषण की अनुमति मिलती है।
एलिसा द्वारा विश्लेषण का पता लगाया गया
एलिसा कई एंटीजन या एंटीबॉडी का पता लगाने की अनुमति देता है, जिनमें शामिल हैं:
- वायरस: एचआईवी, हेपेटाइटिस, हर्पीसवायरस, इन्फ्लूएंजा
- बैक्टीरिया और परजीवी: लाइम, सिफलिस, टॉक्सोप्लाज्मोसिस
- हार्मोन: इंसुलिन, वृद्धि हार्मोन, थायराइड हार्मोन
- कैंसर बायोमार्कर: पीएसए, सीए-125, एएफपी
- सीरम एंटीबॉडीज: रूमेटोइड कारक, एएनए, एलर्जी
- चिकित्सीय दवाएं: स्तर और प्रभावकारिता की निगरानी
- बायोमोलेक्युलस: साइटोकिन्स, आसंजन अणु, रिसेप्टर्स
एलिसा परीक्षण के अनुप्रयोग
एलिसा परीक्षण के प्रमुख उपयोगों में शामिल हैं:
- संक्रामक रोग निदान: एचआईवी, लाइम, चगास
- एलर्जी परीक्षण: एलर्जी के प्रति IgE एंटीबॉडी की पहचान करें
- ऑन्कोलॉजी स्क्रीनिंग: पीएसए या सीए-125 जैसे ट्यूमर मार्कर
- एंडोक्रिनोलॉजी: प्रजनन क्षमता, विकास संबंधी विकार, अधिवृक्क कार्य
- ऑटोइम्यूनिटी परीक्षण: सीलिएक रोग, ल्यूपस, रुमेटीइड गठिया
- विष विज्ञान: चिकित्सीय दवा निगरानी, नशीली दवाओं के दुरुपयोग की जांच
- जैव प्रौद्योगिकी: पुनः संयोजक प्रोटीन विश्लेषण, एपिटोप मैपिंग
- खाद्य सुरक्षा: खराब, दूषित या एलर्जी वाले भोजन का पता लगाना
एलिसा परीक्षण के बारे में अक्सर पूछे जाने वाले प्रश्न
एलिसा या एंजाइम-लिंक्ड इम्युनोसॉरबेंट परख बायोमोलेक्यूल्स का पता लगाने के लिए रंग प्रतिक्रियाओं से जुड़े एंटीबॉडी का लाभ उठाती है।
एलिसा क्या पता लगाती है?
एलिसा एंजाइमेटिक रंग प्रतिक्रियाओं से जुड़े एंटीबॉडी का उपयोग करके एंटीजन, एंटीबॉडी या प्रोटीन जैसे विशिष्ट विश्लेषक की उपस्थिति का पता लगाता है।
एलिसा के लिए किस प्रकार के नमूनों का उपयोग किया जा सकता है?
एलिसा को सीरम, प्लाज्मा, मूत्र, लार, सेल कल्चर सतह पर तैरनेवाला और विश्लेषण युक्त अन्य जैविक तरल नमूनों पर किया जा सकता है।
एलिसा का उपयोग करके किन रोगों का निदान किया जाता है?
एलिसा परीक्षण एचआईवी और लाइम जैसी संक्रामक बीमारियों, सीलिएक रोग जैसे ऑटोइम्यूनिटी विकारों, ट्यूमर मार्करों के माध्यम से कैंसर और एलर्जी का निदान करता है।
एलिसा क्यों उपयोगी है?
एलिसा स्वचालन में आसानी के साथ-साथ उच्च संवेदनशीलता और विशिष्टता प्रदान करता है, जिससे यह कई जैव अणुओं का पता लगाने और मात्रा निर्धारित करने के लिए एक बहुमुखी मंच बन जाता है।
एलिसा में किस उपकरण का उपयोग किया जाता है?
मुख्य उपकरण अभिकर्मकों को बांधने के लिए माइक्रोवेल प्लेट, सटीक पिपेट, इनक्यूबेटर, वॉशर, प्रतिक्रियाओं को मापने के लिए फोटोमीटर और डेटा का विश्लेषण करने के लिए सॉफ्टवेयर हैं।
एलिसा परीक्षण चरण-दर-चरण कैसे किया जाता है?
एलिसा परीक्षण में निम्नलिखित प्रमुख चरण शामिल हैं:
- लक्ष्य विश्लेषण के लिए विशिष्ट कैप्चर एंटीबॉडी के साथ कुओं को कोट करें।
- गैर-विशिष्ट बंधन को रोकने के लिए कुओं में खुली जगहों को अवरुद्ध करें।
- पतला रोगी के नमूने और ज्ञात विश्लेषणात्मक एकाग्रता के मानक जोड़ें।
- अनबाउंड घटकों को हटाने के लिए कुओं को धोएं।
- एक पता लगाने वाले एंटीबॉडी-एंजाइम संयुग्म को जोड़ें जो कैप्चर किए गए विश्लेषण से जुड़ता है।
- अनबाउंड कंजुगेट को हटाने के लिए दोबारा धोएं।
- एक सब्सट्रेट समाधान जोड़ें जो रंग उत्पन्न करने के लिए एक एंजाइम के साथ प्रतिक्रिया करता है।
- रंग विकसित होने के बाद रोकने वाला घोल डालें।
- अवशोषण या प्रतिदीप्ति संकेतों को मापें।
- मानक वक्र से संकेतों की तुलना करके विश्लेषण एकाग्रता की मात्रा निर्धारित करें।
प्रशिक्षित प्रयोगशाला कर्मियों , मानकीकृत अभिकर्मकों और कैलिब्रेटेड उपकरणों के साथ , एलिसा बायोमोलेक्यूल्स के इन विट्रो पता लगाने के लिए एक सटीक, संवेदनशील प्रयोगशाला परीक्षण प्रदान करता है।
एलिसा इम्यूनोएसे परीक्षण के बारे में मुख्य बिंदु
- लक्षित एंटीजन या एंटीबॉडी विश्लेषणों को पकड़ने और उनका पता लगाने के लिए एंटीबॉडी का उपयोग करता है
- जैविक नमूनों से असंख्य विश्लेषणों की मात्रा निर्धारित करने की बहुमुखी तकनीक
- प्रत्यक्ष, अप्रत्यक्ष, सैंडविच और प्रतिस्पर्धी मुख्य एलिसा वेरिएंट हैं
- संक्रामक रोगों, कैंसर, एलर्जी, हार्मोन, दवाओं के प्रति अत्यधिक विशिष्ट और संवेदनशील
- तीव्र बदलाव के साथ उच्च-मात्रा परीक्षण के स्वचालन की अनुमति देता है
- अन्य एंटीबॉडी परीक्षणों की तुलना में अधिक किफायती और मात्रात्मक
- सटीक, प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य परिणामों के लिए मानकीकरण महत्वपूर्ण है
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