एलिसा परीक्षण कैसे काम करता है? एक बहुमुखी इम्यूनोपरख
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एलिसा (एंजाइम-लिंक्ड इम्यूनोसोर्बेंट परख) एक अपरिहार्य प्रयोगशाला परीक्षण है जिसका उपयोग निदान और अनुसंधान अनुप्रयोगों की एक विस्तृत श्रृंखला के लिए एंटीबॉडी, एंटीजन, प्रोटीन और अन्य पदार्थों का पता लगाने के लिए किया जाता है।
एलिसा परीक्षण कैसे काम करता है?
एलिसा लक्षित विश्लेषकों की पहचान करने के लिए प्रतिरक्षा परीक्षण सिद्धांतों का लाभ उठाता है:
- कैप्चर एंटीबॉडी के साथ सतह को कोट करना : एलिसा प्लेट की सतह को मापे जा रहे पदार्थ के लिए विशिष्ट एंटीबॉडी के साथ कोट किया जाता है। यह मिलान करने वाले विश्लेषकों को "कैप्चर" करता है।
- अवरोधक स्थल : अवरोधक प्रोटीन प्लेट पर किसी भी खुले स्थान से जुड़ जाते हैं, ताकि बाद में गैर-विशिष्ट बंधन को रोका जा सके।
- द्रव के नमूने मिलाना : रोगी के सीरम, मूत्र, लार या अन्य तरल पदार्थ जिसमें विश्लेषक पदार्थ होता है, मिलाए जाते हैं, ताकि वे कैप्चर एंटीबॉडी से बंध सकें।
- धुलाई : धुलाई से अनबाउंड घटक हट जाते हैं, तथा केवल कैप्चर किए गए विश्लेषक ही प्लेट पर रह जाते हैं।
- पता लगाने वाले एंटीबॉडी जोड़ना : एंजाइमों के साथ मिलकर एंटीबॉडी जोड़े जाते हैं जो बंधे हुए विश्लेषकों से जुड़ जाते हैं। इस्तेमाल किए जाने वाले आम एंजाइम हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज (HRP) या एल्केलाइन फॉस्फेटेज (AP) हैं।
- सब्सट्रेट विलयन : जब सब्सट्रेट मिलाया जाता है, तो युग्मित एंजाइमों के साथ अभिक्रिया से मापने योग्य रंग परिवर्तन या उपस्थित विश्लेषक की सांद्रता के अनुपात में प्रतिदीप्ति उत्पन्न होती है।
- प्रतिक्रिया रोकना : एक रोकने वाला घोल रंग की तीव्रता या प्रतिदीप्ति के आधार पर मात्रा का निर्धारण करने के लिए प्रतिक्रिया को रोक देता है।
एलिसा परीक्षण के प्रकार
विशिष्ट विश्लेषकों के लिए विभिन्न नमूनों का परीक्षण करने के लिए कई एलिसा प्रकार डिजाइन किए गए हैं:
- डायरेक्ट एलिसा (एंटीजन का पता लगाता है) : एंटीबॉडी को कैप्चर करके सैंपल में मौजूद एंटीजन को बांधा जाता है। एंटीबॉडी का पता लगाने से एंटीजन भी बंध जाते हैं। एंजाइम प्रतिक्रिया से उपस्थिति का संकेत मिलता है।
- अप्रत्यक्ष एलिसा (एंटीबॉडी का पता लगाना) : सतह पर लेपित एंटीजन। यदि नमूने में एंटीबॉडी मौजूद हैं, तो वे एंटीजन को बांधते हैं। एंजाइम के साथ जोड़ा गया द्वितीयक एंटीबॉडी नमूना एंटीबॉडी को बांधता है, जो उपस्थिति का संकेत देता है।
- सैंडविच एलिसा (एंटीजन का पता लगाता है) : सतह पर एक कैप्चर एंटीबॉडी होती है। सैंपल एंटीजन कैप्चर एंटीबॉडी को बांधता है। एंटीबॉडी का पता लगाने से एंटीजन भी बंध जाते हैं, जिससे एंजाइम सब्सट्रेट पर काम कर पाते हैं।
- प्रतिस्पर्धी एलिसा (छोटे एंटीजन/हैप्टेंस) : नमूना एंटीजन और लेबल वाले एंटीजन दोनों ही प्लेट पर लेपित एंटीबॉडी पर बंधन स्थलों के लिए प्रतिस्पर्धा करते हैं। नमूने में अधिक एंटीजन = कम लेबल वाले एंटीजन बंधन और कमज़ोर संकेत।
एलिसा परीक्षण के लाभ
- नमूने के भीतर पता लगाने के लिए अत्यधिक विशिष्ट और संवेदनशील। विश्लेषक सांद्रता को माप सकता है।
- एकाधिक नमूनों के उच्च थ्रूपुट स्वचालित विश्लेषण के लिए उपयुक्त।
- अन्य एंटीबॉडी पहचान विधियों की तुलना में अपेक्षाकृत सस्ती।
- उचित रूप से विकसित किए जाने पर प्रयोगशालाओं में परिणामों के मानकीकरण की अनुमति मिलती है।
- बहुमुखी: कई जैव-अणुओं, रोगजनकों, दवाओं, एलर्जी आदि का पता लगा सकता है और उनका विश्लेषण कर सकता है।
- अन्य तीव्र प्रतिरक्षा निदान के विपरीत, नमूने कई दिनों तक स्थिर रहते हैं, जिससे बैच विश्लेषण संभव हो जाता है।
एलिसा द्वारा पता लगाए गए विश्लेषक
एलिसा से कई एंटीजन या एंटीबॉडी का पता लगाया जा सकता है, जिनमें शामिल हैं:
- वायरस: एचआईवी, हेपेटाइटिस, हर्पीजवायरस, इन्फ्लूएंजा
- बैक्टीरिया और परजीवी: लाइम, सिफलिस, टोक्सोप्लाज़मोसिस
- हार्मोन: इंसुलिन, वृद्धि हार्मोन, थायरॉयड हार्मोन
- कैंसर बायोमार्कर: PSA, CA-125, AFP
- सीरम एंटीबॉडी: रुमेटी कारक, एएनए, एलर्जी
- चिकित्सीय औषधियाँ: स्तर और प्रभावकारिता की निगरानी
- जैव अणु: साइटोकाइन्स, आसंजन अणु, रिसेप्टर्स
एलिसा परीक्षण के अनुप्रयोग
एलिसा परीक्षण के प्रमुख उपयोगों में शामिल हैं:
- संक्रामक रोग निदान: एचआईवी, लाइम, चागास
- एलर्जी परीक्षण: एलर्जी के प्रति IgE एंटीबॉडी की पहचान करना
- ओन्कोलॉजी स्क्रीनिंग: ट्यूमर मार्कर जैसे PSA या CA-125
- एंडोक्राइनोलॉजी: प्रजनन क्षमता, विकास संबंधी विकार, अधिवृक्क कार्य
- स्वप्रतिरक्षा परीक्षण: सीलिएक रोग, ल्यूपस, रुमेटी गठिया
- विष विज्ञान: चिकित्सीय दवा निगरानी, नशीली दवाओं के दुरुपयोग की जांच
- जैव प्रौद्योगिकी: पुनः संयोजक प्रोटीन विश्लेषण, एपिटोप मानचित्रण
- खाद्य सुरक्षा: खराब, संदूषित या एलर्जी वाले भोजन का पता लगाना
एलिसा परीक्षण के बारे में अक्सर पूछे जाने वाले प्रश्न
एलिसा या एंजाइम-लिंक्ड इम्यूनोसोर्बेंट परख जैव-अणुओं का पता लगाने के लिए रंग प्रतिक्रियाओं से जुड़े एंटीबॉडी का लाभ उठाती है।
एलिसा क्या पता लगाता है?
एलिसा (ELISA) एंजाइमी रंग प्रतिक्रियाओं से जुड़े एंटीबॉडी का उपयोग करके एंटीजन, एंटीबॉडी या प्रोटीन जैसे विशिष्ट विश्लेषक की उपस्थिति का पता लगाता है।
एलिसा के लिए किस प्रकार के नमूनों का उपयोग किया जा सकता है?
एलिसा परीक्षण सीरम, प्लाज्मा, मूत्र, लार, कोशिका संवर्धन सतह पर तैरने वाले तरल पदार्थ तथा विश्लेषक युक्त अन्य जैविक द्रव नमूनों पर किया जा सकता है।
एलिसा का उपयोग करके किन रोगों का निदान किया जाता है?
एलिसा परीक्षण से एचआईवी और लाइम जैसे संक्रामक रोगों, सीलिएक रोग जैसे स्वप्रतिरक्षा विकारों, ट्यूमर मार्करों के माध्यम से कैंसर और एलर्जी का निदान किया जाता है।
एलिसा क्यों उपयोगी है?
एलिसा उच्च संवेदनशीलता और विशिष्टता के साथ-साथ स्वचालन में आसानी प्रदान करता है, जिससे यह असंख्य जैव-अणुओं का पता लगाने और उनकी मात्रा निर्धारित करने के लिए एक बहुमुखी मंच बन जाता है।
एलिसा में कौन से उपकरण का उपयोग किया जाता है?
प्रमुख उपकरण हैं - अभिकर्मकों को बांधने के लिए माइक्रोवेल प्लेट, परिशुद्ध पिपेट, इनक्यूबेटर, वॉशर, प्रतिक्रियाओं को मापने के लिए फोटोमीटर, तथा डेटा का विश्लेषण करने के लिए सॉफ्टवेयर।
एलिसा परीक्षण चरण-दर-चरण कैसे किया जाता है?
एलिसा परीक्षण में निम्नलिखित प्रमुख चरण शामिल हैं:
- लक्ष्य विश्लेषक के लिए विशिष्ट कैप्चर एंटीबॉडी के साथ कुओं को कोट करें।
- गैर-विशिष्ट बंधन को रोकने के लिए कुओं में खुले स्थानों को अवरुद्ध करें।
- पतला रोगी के नमूने और ज्ञात विश्लेषक सांद्रता के मानकों को जोड़ें।
- अनबाउंड घटकों को हटाने के लिए कुओं को धोएँ।
- एक डिटेक्टिंग एंटीबॉडी-एंजाइम संयुग्म जोड़ें जो कैप्चर किए गए विश्लेषक से बंधता है।
- अनबाउंड संयुग्म को हटाने के लिए पुनः धोएँ।
- एक सब्सट्रेट घोल डालें जो एंजाइम के साथ प्रतिक्रिया करके रंग उत्पन्न करता है।
- रंग विकसित होने के बाद स्टॉपिंग सॉल्यूशन डालें।
- अवशोषण या प्रतिदीप्ति संकेतों को मापें.
- मानक वक्र से संकेतों की तुलना करके विश्लेष्य सांद्रता का परिमाणन करें।
प्रशिक्षित प्रयोगशाला कर्मियों , मानकीकृत अभिकर्मकों और अंशांकित उपकरणों के साथ , एलिसा जैव-अणुओं का इन-विट्रो पता लगाने के लिए एक सटीक, संवेदनशील प्रयोगशाला परीक्षण प्रदान करता है।
एलिसा इम्यूनोएसे परीक्षण के बारे में मुख्य बातें
- लक्षित एंटीजन या एंटीबॉडी विश्लेषकों को पकड़ने और पता लगाने के लिए एंटीबॉडी का उपयोग करता है
- जैविक नमूनों से असंख्य विश्लेषकों को परिमाणित करने की बहुमुखी तकनीक
- प्रत्यक्ष, अप्रत्यक्ष, सैंडविच और प्रतिस्पर्धी मुख्य एलिसा प्रकार हैं
- संक्रामक रोगों, कैंसर, एलर्जी, हार्मोन, दवाओं के प्रति अत्यधिक विशिष्ट और संवेदनशील
- तेजी से बदलाव के साथ उच्च मात्रा में परीक्षण के स्वचालन की अनुमति देता है
- अन्य एंटीबॉडी परीक्षणों की तुलना में अधिक किफायती और मात्रात्मक
- सटीक, पुनरुत्पादनीय परिणामों के लिए मानकीकरण महत्वपूर्ण है
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