पीसीआर, आरटी-पीसीआर और क्यूपीसीआर लक्षित प्रवर्धन तकनीकों के बीच अंतर

पीसीआर (पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन) और क्यूपीसीआर (मात्रात्मक पीसीआर) के बीच मुख्य अंतर है:

पीसीआर

• लक्ष्य डीएनए अनुक्रम की उपस्थिति का पता लगाता है
• गुणात्मक परीक्षण (डीएनए की उपस्थिति या अनुपस्थिति)
• डीएनए की मात्रा निर्धारित करने की अनुमति नहीं देता

क्यूपीसीआर

• डीएनए सांद्रता की मात्रा निर्धारित करता है
• मात्रात्मक परीक्षण
• सटीक डीएनए स्तर या जीन अभिव्यक्ति को मापता है
• अधिक संवेदनशील और सटीक परिमाणीकरण

पीसीआर में, डीएनए अनुक्रम तेजी से बढ़ता है जब तक कि अभिकर्मक समाप्त नहीं हो जाते और अनुक्रम का पता लगाने के लिए गुणात्मक सकारात्मक या नकारात्मक परिणाम देते हैं।

क्यूपीसीआर में, फ्लोरोसेंट टैग प्रत्येक प्रतिकृति चक्र के दौरान डीएनए की मात्रा निर्धारित करने की अनुमति देते हैं। परिणाम केवल अनुक्रम उपस्थिति की गुणात्मक सकारात्मकता के बजाय सटीक एकाग्रता है।

जबकि पीसीआर और क्यूपीसीआर दोनों लक्ष्य डीएनए को बढ़ाते हैं, क्यूपीसीआर तकनीक अतिरिक्त रूप से वास्तविक समय में प्रवर्धन प्रगति की निगरानी करती है। यह सटीक लक्ष्य डीएनए परिमाणीकरण की अनुमति देता है जो जीन अभिव्यक्ति विश्लेषण, सूक्ष्मजीव भार का पता लगाने आदि के लिए सटीक मापित स्तरों की आवश्यकता के लिए उपयोगी है।

संक्षेप में, दोनों डीएनए को गुणा करते हैं लेकिन क्यूपीसीआर संख्यात्मक परिणामों की आवश्यकता वाले कुछ अनुप्रयोगों के लिए एक साथ संवेदनशील मात्रा का ठहराव भी सक्षम बनाता है।

रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन पॉलीमरेज़ चेन रिएक्शन (आरटी-पीसीआर) में शामिल मुख्य चरण हैं:

1. आरएनए निष्कर्षण : सबसे पहले, आरएनए को नमूने (कोशिकाओं, ऊतकों आदि) से निकाला और शुद्ध किया जाता है। अच्छी गुणवत्ता वाला आरएनए महत्वपूर्ण है।
2. रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन : निकाले गए आरएनए को रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस नामक एंजाइम द्वारा पूरक डीएनए (सीडीएनए) में परिवर्तित किया जाता है।
3. प्रारंभिक विकृतीकरण : डबल-स्ट्रैंडेड डीएनए को एकल स्ट्रैंड में अलग करने के लिए सीडीएनए नमूने को गर्म किया जाता है।
4. प्राइमरों के साथ पीसीआर प्रवर्धन : बार-बार थर्मल साइक्लिंग अनुक्रम विशिष्ट प्राइमरों का उपयोग करके लक्ष्य सीडीएनए को तेजी से बढ़ाने में मदद करता है।
5. अंतिम विस्तार: अंतिम लम्बी किस्में अभिकर्मकों और इष्टतम तापमान की आपूर्ति करके पूरी की जाती हैं।
6. विज़ुअलाइज़ेशन : परिमाणीकरण और विश्लेषण से पहले पुष्टि के लिए प्रवर्धित पीसीआर उत्पादों को अंततः एगरोज़ जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस के माध्यम से विज़ुअलाइज़ किया जाता है।

तो संक्षेप में, प्रमुख चरण हैं:

1. आरएनए निष्कर्षण
2. आरएनए का सीडीएनए में रूपांतरण
3. लक्ष्य सीडीएनए का पीसीआर प्रवर्धन
4. दृश्य पहचान और परिमाणीकरण

इससे आरएनए की छोटी मात्रा को भी पहले आरटी-पीसीआर तकनीक का उपयोग करके सीडीएनए के रूप में प्रवर्धित करके अध्ययन किया जा सकता है।

प्रत्येक पीसीआर, आरटी-पीसीआर और क्यूपीसीआर पर किए जाने वाले सामान्य परीक्षण क्या हैं?

यहां पीसीआर, आरटी-पीसीआर और क्यूपीसीआर तकनीकों का उपयोग करके किए जाने वाले कुछ सामान्य परीक्षण दिए गए हैं:

पीसीआर (पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन)

• रोगज़नक़ का पता लगाना (बैक्टीरिया, वायरस)
• आनुवंशिक रोग परीक्षण
• डीएनए फिंगरप्रिंटिंग/फोरेंसिक
• आनुवंशिक अनुकूलता परीक्षण
• डीएनए संशोधनों का पता लगाना

आरटी-पीसीआर (रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन पीसीआर)

• जीन अभिव्यक्ति प्रोफाइलिंग
• वायरल लोड का पता लगाना
• कैंसर बायोमार्कर विश्लेषण
• माइक्रोआरएनए विश्लेषण
• वायरल संक्रमण का निदान
• आरएनए हस्तक्षेप का सत्यापन

क्यूपीसीआर (मात्रात्मक पीसीआर)

• वायरल लोड मात्रा का निर्धारण
• जीएमओ का पता लगाना/मात्रा निर्धारण
• जीन अभिव्यक्ति स्तर विश्लेषण
• माइक्रोबियल का पता लगाना/मात्रा निर्धारण
• प्रतिलिपि संख्या भिन्नता विश्लेषण
• सीडीएनए परिमाणीकरण
• बायोमार्कर सत्यापन

संक्षेप में, जबकि प्रवर्धन की अंतर्निहित तकनीक समान है, पीसीआर, आरटी-पीसीआर और क्यूपीसीआर को आवश्यकता के आधार पर विभिन्न प्रकार के गुणात्मक पता लगाने बनाम सटीक मात्रात्मक विश्लेषण परख में लागू किया जाता है।

उच्च संवेदनशीलता निदान से अनुसंधान तक - कई डोमेन में बेहतर परिशुद्धता और सटीकता के लिए डीएनए/आरएनए के सूक्ष्म अंशों को तेजी से गुणा करने की अनुमति देती है।

निष्कर्ष