पीसीआर (PCR), आरटी-पीसीआर (RT-PCR) और क्यूपीसीआर (qPCR) – प्रकार, अंतर और अनुप्रयोगों की व्याख्या
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पीसीआर (PCR), आरटी-पीसीआर (RT-PCR) और क्यूपीसीआर (qPCR)
जब पुणे में कोई डॉक्टर आरटी-पीसीआर (RT-PCR) परीक्षण का आदेश देता है— चाहे वह कोविड-19 (COVID-19), तपेदिक (Tuberculosis), हेपेटाइटिस (Hepatitis) या किसी आनुवंशिक स्थिति के लिए हो— तो मरीज़ अक्सर पूछते हैं: क्या यह पीसीआर (PCR) परीक्षण के समान है? आरटी-पीसीआर (RT-PCR) और क्यूपीसीआर (qPCR) में क्या अंतर है? एक परीक्षण में एक साधारण सकारात्मक या नकारात्मक परिणाम क्यों आता है जबकि दूसरा वायरल लोड संख्या बताता है? ये वास्तव में उपयोगी प्रश्न हैं, क्योंकि परीक्षण के पीछे की तकनीक को समझना मरीज़ों को उनके परिणामों की अधिक सटीक व्याख्या करने और अपने इलाज करने वाले चिकित्सक से बेहतर प्रश्न पूछने में मदद करता है। हेल्थकेयर एंट सिककेयर (healthcare nt sickcare) में, जो 2007 से औंध, पुणे में संचालित एक एनएबीएल-पार्टनर डायग्नोस्टिक सेवा है, हम संक्रमणों, कैंसर मार्करों, आनुवंशिक बीमारियों और पोस्ट-कोविड वायरल लोड मूल्यांकन के लिए आरटी-पीसीआर (RT-PCR) और क्यूपीसीआर (qPCR)-आधारित परीक्षणों को संसाधित करते हैं। यह लेख पीसीआर (PCR), आरटी-पीसीआर (RT-PCR) और क्यूपीसीआर (qPCR) के बीच वास्तविक अंतर को सरल भाषा में समझाता है।
आरटी-पीसीआर (RT-PCR) प्रकार का उपयोग चिकित्सा स्थितियों की एक विस्तृत श्रृंखला में किया जाता है— सक्रिय कोविड-19 (COVID-19) और तपेदिक (Tuberculosis) के निदान से लेकर एचपीवी (HPV), हेपेटाइटिस बी (Hepatitis B) वायरल लोड और कैंसर जीन म्यूटेशन का पता लगाने तक। प्रयोगशाला द्वारा किस एम्प्लीफिकेशन तकनीक का उपयोग किया जाता है, इसका चुनाव मनमाना नहीं होता है; यह इस बात पर निर्भर करता है कि लक्ष्य डीएनए (DNA) है या आरएनए (RNA), और क्या परिणाम गुणात्मक (हाँ/नहीं) या मात्रात्मक (कितना) होना चाहिए।
पीसीआर (PCR) क्या है — और इसका उपयोग डायग्नोस्टिक परीक्षण में क्यों किया जाता है?
पीसीआर (PCR) (पॉलीमरेज़ चेन रिएक्शन) एक प्रयोगशाला तकनीक है जो डीएनए (DNA) के एक विशिष्ट खंड को तेजी से बढ़ाती है, जिससे नैदानिक नमूने में आनुवंशिक सामग्री की थोड़ी मात्रा का भी पता लगाया जा सकता है। इसे 1983 में कैरी मुलिस (Kary Mullis) द्वारा विकसित किया गया था और अब यह दुनिया भर में आणविक निदान का आधार है— जिसमें भारत में किए जाने वाले अधिकांश संक्रामक रोग परीक्षण शामिल हैं।
नैदानिक संदर्भ में, पीसीआर (PCR) का उपयोग मरीज़ के नमूने— आमतौर पर रक्त, मूत्र, स्वाब या ऊतक में बैक्टीरिया, वायरस, कवक या आनुवंशिक उत्परिवर्तन के डीएनए (DNA) का पता लगाने के लिए किया जाता है। क्योंकि पीसीआर (PCR) घंटों के भीतर डीएनए (DNA) को लाखों गुना बढ़ा देता है, यह उन रोगजनकों का पता लगा सकता है जो इतनी कम मात्रा में मौजूद होते हैं कि पारंपरिक कल्चर या माइक्रोस्कोपी से उन्हें पहचानना असंभव होता है। आईसीएमआर (ICMR) ने मार्च 2020 से भारत में कोविड-19 (COVID-19) के लिए आरटी-पीसीआर (RT-PCR) को स्वर्ण मानक पुष्टिकरण परीक्षण के रूप में नामित किया, इसकी बेहतर संवेदनशीलता और विशिष्टता के कारण एंटीबॉडी-आधारित रैपिड परीक्षणों को प्राथमिक निदान उपकरण के रूप में प्रतिस्थापित किया।
आरटी-पीसीआर (RT-PCR) बनाम पीसीआर (PCR) — क्या वे एक ही परीक्षण हैं?
आरटी-पीसीआर (RT-PCR) (रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन पॉलीमरेज़ चेन रिएक्शन) और पीसीआर (PCR) संबंधित लेकिन समान तकनीकें नहीं हैं। मुख्य अंतर शुरुआती आनुवंशिक सामग्री है: मानक पीसीआर (PCR) डीएनए (DNA) के साथ काम करता है, जबकि आरटी-पीसीआर (RT-PCR) आरएनए (RNA) के साथ काम करता है।
कई वायरस— जिनमें SARS-CoV-2, इन्फ्लूएंजा, एचआईवी (HIV) और हेपेटाइटिस सी (Hepatitis C) शामिल हैं— अपनी आनुवंशिक जानकारी डीएनए (DNA) के बजाय आरएनए (RNA) के रूप में संग्रहीत करते हैं। चूंकि मानक पीसीआर (PCR) केवल डीएनए (DNA) को बढ़ा सकता है, इसलिए एक अतिरिक्त कदम की आवश्यकता होती है: आरएनए (RNA) को पहले रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस (reverse transcriptase) नामक एंजाइम का उपयोग करके पूरक डीएनए (complementary DNA) (सीडीएनए - cDNA) में परिवर्तित किया जाता है। यह कदम आरटी-पीसीआर (RT-PCR) को इसका नाम देता है। फिर सीडीएनए (cDNA) को मानक पीसीआर (PCR) द्वारा बढ़ाया जाता है।
भारत में रोज़मर्रा के नैदानिक उपयोग में— जिसमें कोविड-19 (COVID-19) परीक्षण संदर्भ भी शामिल है— "पीसीआर परीक्षण" और "आरटी-पीसीआर परीक्षण" शब्दों का परस्पर उपयोग किया जाता है, जिससे भ्रम हो सकता है। जब पुणे में कोई डॉक्टर "कोविड पीसीआर परीक्षण" का आदेश देता है, तो प्रयोगशाला तकनीकी रूप से एक आरटी-पीसीआर (RT-PCR) परख करती है, क्योंकि SARS-CoV-2 एक आरएनए वायरस है। सुविधा के लिए "पीसीआर" का संक्षिप्त रूप बोलचाल की भाषा में उपयोग किया जाता है, वैज्ञानिक सटीकता के लिए नहीं।
भारत में कोरोनावायरस महामारी और इसके वेरिएंट पर हमारा संबंधित लेख बताता है कि महामारी के दौरान महाराष्ट्र में आरटी-पीसीआर (RT-PCR) को बड़े पैमाने पर कैसे तैनात किया गया था, और पोस्ट-कोविड रक्त परीक्षण पर हमारी मार्गदर्शिका पुष्टि किए गए आरटी-पीसीआर (RT-PCR)-पॉजिटिव संक्रमण से ठीक होने के बाद क्या परीक्षण करना है, इसे शामिल करती है।
आरटी-पीसीआर (RT-PCR) बनाम क्यूपीसीआर (qPCR) — क्या अंतर है?
क्यूपीसीआर (qPCR) (मात्रात्मक पीसीआर - Quantitative PCR, जिसे रियल-टाइम पीसीआर - Real-Time PCR भी कहा जाता है) एक मापन आयाम जोड़ता है जो मानक पीसीआर (PCR) में नहीं होता है: यह नमूने में कितनी लक्ष्य डीएनए (DNA) या आरएनए (RNA) मौजूद है, इसे मापता है, न कि केवल यह कि क्या यह मौजूद है।
मानक पीसीआर (PCR) में, अभिकर्मक समाप्त होने तक प्रतिक्रिया चलती है— अंतिम परिणाम एक जेल बैंड होता है जो लक्ष्य अनुक्रम की उपस्थिति या अनुपस्थिति को इंगित करता है। क्यूपीसीआर (qPCR) में, फ्लोरोसेंट डाई अणु प्रतिक्रिया में शामिल होते हैं और प्रत्येक प्रवर्धन चक्र में वास्तविक समय में मापे जाते हैं। जैसे-जैसे अधिक डीएनए (DNA) प्रवर्धित होता है, फ्लोरोसेंट सिग्नल आनुपातिक रूप से बढ़ता है, जिससे सॉफ्टवेयर लक्ष्य डीएनए (DNA) या आरएनए (RNA) की सटीक प्रारंभिक सांद्रता की गणना कर सकता है।
| विशेषता | पीसीआर (PCR) | आरटी-पीसीआर (RT-PCR) | क्यूपीसीआर (qPCR) (रियल-टाइम पीसीआर - Real-Time PCR) |
|---|---|---|---|
| शुरुआती सामग्री | डीएनए (DNA) | आरएनए (RNA) (सीडीएनए - cDNA में परिवर्तित) | डीएनए (DNA) या सीडीएनए (cDNA) (आरएनए - RNA पहले परिवर्तित) |
| परिणाम का प्रकार | गुणात्मक (सकारात्मक / नकारात्मक) | गुणात्मक या मात्रात्मक | मात्रात्मक (सटीक प्रतिलिपि संख्या) |
| पता लगाने की विधि | जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस | जेल या प्रतिदीप्ति | फ्लोरोसेंट डाई — वास्तविक समय |
| गति | कई घंटे | कई घंटे | तेज़ — प्रवर्धन के दौरान परिणाम |
| संवेदनशीलता | उच्च | बहुत उच्च | मात्राकरण के साथ बहुत उच्च |
| सामान्य नैदानिक उपयोग | बैक्टीरियल डीएनए (DNA), आनुवंशिक उत्परिवर्तन | कोविड-19 (COVID-19), टीबी (TB), एचआईवी (HIV), हेपेटाइटिस | एचआईवी वायरल लोड, एचबीवी लोड, कैंसर जीन |
आरटी-पीसीआर (RT-PCR) बनाम रियल-टाइम पीसीआर (Real-Time PCR) — क्या वे समान हैं?
नहीं — आरटी-पीसीआर (RT-PCR) और रियल-टाइम पीसीआर (Real-Time PCR) समान नहीं हैं, हालांकि इन शब्दों को आमतौर पर भ्रमित किया जाता है। आरटी-पीसीआर (RT-PCR) रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस (reverse transcriptase) का उपयोग करके आरएनए (RNA) को प्रवर्धन से पहले सीडीएनए (cDNA) में परिवर्तित करने को संदर्भित करता है— यह शुरुआती सामग्री का वर्णन करता है। रियल-टाइम पीसीआर (Real-Time PCR) (जिसे क्यूपीसीआर - qPCR भी कहा जाता है) मापन पद्धति को संदर्भित करता है— प्रत्येक प्रवर्धन चक्र के दौरान डीएनए (DNA) को अंत में मापने के बजाय उसकी मात्रा निर्धारित करने की क्षमता। दोनों को जोड़ा जा सकता है: जब आरटी-पीसीआर (RT-PCR) को फ्लोरोसेंट मात्राकरण के साथ वास्तविक समय में किया जाता है, तो इसे क्यूआरटी-पीसीआर (qRT-PCR) या रियल-टाइम आरटी-पीसीआर (Real-Time RT-PCR) कहा जाता है।
भारत में आईसीएमआर (ICMR)-अनुमोदित प्रयोगशालाओं द्वारा आधिकारिक तौर पर उपयोग किया जाने वाला कोविड-19 (COVID-19) परीक्षण तकनीकी रूप से एक रियल-टाइम आरटी-पीसीआर (Real-Time RT-PCR) परख है— जिसका अर्थ है कि यह रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन (आरएनए वायरस को संभालने के लिए) और रियल-टाइम फ्लोरोसेंट डिटेक्शन (संवेदनशीलता और गति के लिए) का उपयोग करता है। यह अंतर मायने रखता है क्योंकि यह बताता है कि कोविड-19 (COVID-19) पीसीआर (PCR) परिणाम जल्दी और एक साइकिल थ्रेशोल्ड (Ct) मान के साथ क्यों रिपोर्ट किए जाते हैं— एक संख्या जो दर्शाती है कि वायरस का पता लगाने के लिए कितने प्रवर्धन चक्रों की आवश्यकता थी, जो वायरल लोड के साथ विपरीत रूप से सहसंबंधित है।
भारत में पीसीआर (PCR), आरटी-पीसीआर (RT-PCR) और क्यूपीसीआर (qPCR) का उपयोग करके कौन से परीक्षण किए जाते हैं?
यह समझना कि किस नैदानिक परीक्षण के लिए किस तकनीक का उपयोग किया जाता है, रोगियों को कब और क्यों परीक्षण करना है, इसके बारे में सूचित निर्णय लेने में मदद करता है। पुणे में एनएबीएल (NABL)-पार्टनर प्रयोगशालाओं में किए गए निम्नलिखित परीक्षण पीसीआर (PCR)-आधारित प्रवर्धन का उपयोग करते हैं:
मानक पीसीआर (PCR) का उपयोग करके परीक्षण (डीएनए - DNA का पता लगाना)
- टीबी पीसीआर (TB PCR) / जीनएक्सपर्ट (GeneXpert) — माइकोबैक्टीरियम ट्यूबरकुलोसिस (Mycobacterium tuberculosis) डीएनए (DNA) और रिफाम्पिसिन प्रतिरोध का पता लगाता है। हमारा जीनएक्सपर्ट परीक्षण और टीबी पीसीआर गुणात्मक परीक्षण घर पर संग्रह के साथ उपलब्ध हैं।
- एचपीवी पीसीआर (HPV PCR) और टाइपिंग — डीएनए (DNA) विश्लेषण द्वारा उच्च जोखिम वाले और निम्न जोखिम वाले एचपीवी (HPV) स्ट्रेन का पता लगाता है।
- एचएलए-बी27 पीसीआर (HLA-B27 PCR) — एन्किलोसिंग स्पॉन्डिलाइटिस (ankylosing spondylitis) और रिएक्टिव आर्थराइटिस (reactive arthritis) के लिए आनुवंशिक परीक्षण।
- एमटीएचएफआर म्यूटेशन पीसीआर (MTHFR mutation PCR) — थक्के के जोखिम के लिए आनुवंशिक थ्रोम्बोफिलिया परीक्षण।
- फैक्टर V लेडेन म्यूटेशन (Factor V Leiden mutation) — वंशानुगत थक्के विकार के लिए पीसीआर (PCR)-आधारित आनुवंशिक परीक्षण।
आरटी-पीसीआर (RT-PCR) का उपयोग करके परीक्षण (आरएनए - RNA का पता लगाना)
- कोविड-19 आरटी-पीसीआर (COVID-19 RT-PCR) — SARS-CoV-2 के लिए स्वर्ण मानक पुष्टिकरण परीक्षण।
- एचआईवी आरएनए पीसीआर (HIV RNA PCR) (एचआईवी वायरल लोड) — वायरल आरएनए (RNA) को मापकर एचआईवी (HIV) रोगियों में उपचार प्रतिक्रिया की निगरानी करता है।
- डेंगू आरटी-पीसीआर (Dengue RT-PCR) — एंटीबॉडी विकसित होने से पहले बुखार की बीमारी के दौरान प्रारंभिक पुष्टि।
- इन्फ्लूएंजा ए/बी और एच3एन2 आरटी-पीसीआर (Influenza A/B and H3N2 RT-PCR) — लक्षित उपचार के लिए मौसमी फ्लू स्ट्रेन को अलग करता है।
- हेपेटाइटिस सी (एचसीवी - HCV) आरएनए (RNA) का पता लगाना — सक्रिय एचसीवी (HCV) संक्रमण की पुष्टि करता है और उपचार शुरू करने में मार्गदर्शन करता है।
क्यूपीसीआर (qPCR) या रियल-टाइम आरटी-पीसीआर (Real-Time RT-PCR) का उपयोग करके परीक्षण (मात्रात्मक)
- एचआईवी वायरल लोड — एंटीरेट्रोवाइरल उपचार की प्रभावशीलता का आकलन करने के लिए प्रति एमएल आरएनए (RNA) प्रतियों की मात्रा निर्धारित करता है।
- हेपेटाइटिस बी वायरल लोड (एचबीवी डीएनए क्यूपीसीआर - HBV DNA qPCR) — एंटीवायरल थेरेपी और लिवर क्षति के जोखिम की निगरानी के लिए एचबीवी डीएनए (HBV DNA) की मात्रा निर्धारित करता है।
- बीसीआर-एबीएल मात्रात्मक पीसीआर (BCR-ABL quantitative PCR) — फ्यूजन जीन अभिव्यक्ति को मापकर क्रोनिक मायलॉइड ल्यूकेमिया (सीएमएल - CML) उपचार प्रतिक्रिया की निगरानी करता है।
- सीएमवी (CMV) और ईबीवी (EBV) वायरल लोड — इम्यूनोकॉम्प्रोमाइज्ड रोगियों में वायरल बोझ की मात्रा निर्धारित करता है।
- कोविड-19 (COVID-19) सीटी (Ct) मान की व्याख्या — हर कोविड-19 (COVID-19) पीसीआर (PCR) परीक्षण में रिपोर्ट किया गया सीटी (Ct) मान एक क्यूपीसीआर (qPCR) आउटपुट है; कम सीटी (Ct) = उच्च वायरल लोड।
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आरटी-पीसीआर (RT-PCR) के चरण — परीक्षण वास्तव में कैसे काम करता है
आरटी-पीसीआर (RT-PCR) प्रक्रिया में आरएनए (RNA) निष्कर्षण से लेकर परिणाम उत्पादन तक चार मुख्य अनुक्रमिक चरण शामिल हैं। इन चरणों को समझना रोगियों को यह समझने में मदद करता है कि परीक्षण में कई घंटे क्यों लगते हैं और नमूने की गुणवत्ता क्यों मायने रखती है।
- चरण 1 — आरएनए (RNA) निष्कर्षण: रोगी के नमूने (नासॉफरीनजील स्वाब, रक्त या अन्य ऊतक) को कोशिकाओं को तोड़ने और आरएनए (RNA) को मुक्त करने के लिए रासायनिक अभिकर्मकों के साथ उपचारित किया जाता है। यह निकाला गया आरएनए (RNA) शुद्ध और बरकरार होना चाहिए— यही कारण है कि नमूनों को संग्रह से लेकर प्रयोगशाला प्राप्ति तक सही ढंग से संभाला जाना चाहिए।
- चरण 2 — रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन: निकाले गए आरएनए (RNA) को रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस एंजाइम के साथ इन्क्यूबेट किया जाता है, जो आरएनए (RNA) टेम्पलेट को पढ़ता है और एक पूरक डीएनए (complementary DNA) (सीडीएनए - cDNA) स्ट्रैंड को संश्लेषित करता है। यह वायरल या सेलुलर आरएनए (RNA) को एक अधिक स्थिर डीएनए (DNA) प्रारूप में परिवर्तित करता है जो पीसीआर (PCR) प्रवर्धन से गुजर सकता है।
- चरण 3 — पीसीआर (PCR) प्रवर्धन: सीडीएनए (cDNA) को प्राइमर— छोटे सिंथेटिक डीएनए (DNA) अनुक्रम जो लक्ष्य जीन क्षेत्र से विशेष रूप से जुड़ते हैं— और डीएनए पॉलीमरेज़ एंजाइम के साथ जोड़ा जाता है। मिश्रण दोहराए गए थर्मल साइक्लिंग से गुजरता है: डीएनए (DNA) स्ट्रैंड्स को विकृत (अलग) करने के लिए गर्म करना, प्राइमर बंधन की अनुमति देने के लिए ठंडा करना, और नए डीएनए (DNA) संश्लेषण की अनुमति देने के लिए गर्म करना। प्रत्येक चक्र लक्ष्य डीएनए (DNA) प्रतियों की संख्या को दोगुना कर देता है। 30-45 चक्रों के बाद, एक भी मूल अणु से अरबों प्रतियां उत्पन्न होती हैं।
- चरण 4 — पहचान और परिणाम: गुणात्मक आरटी-पीसीआर (RT-PCR) में, प्रवर्धित डीएनए (DNA) उत्पादों को एगारोज जेल पर चलाया जाता है— एक बैंड की उपस्थिति लक्ष्य की पुष्टि करती है। रियल-टाइम आरटी-पीसीआर (Real-Time RT-PCR) (कोविड-19 - COVID-19 के लिए उपयोग किया जाता है) में, फ्लोरोसेंट सिग्नल को प्रत्येक चक्र में मापा जाता है, जिसमें सीटी (Ct) मान उस चक्र को इंगित करता है जिस पर सिग्नल पहचान दहलीज को पार कर गया। आईसीएमआर (ICMR) दिशानिर्देशों द्वारा कोविड-19 (COVID-19) के लिए 35 से नीचे का सीटी (Ct) मान आमतौर पर सकारात्मक बताया जाता है।
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लोग पीसीआर (PCR), आरटी-पीसीआर (RT-PCR) और क्यूपीसीआर (qPCR) के बारे में भी पूछते हैं
पीसीआर (PCR), आरटी-पीसीआर (RT-PCR) और क्यूपीसीआर (qPCR) आवश्यक आणविक जीव विज्ञान तकनीकें हैं। उनके अंतर, अनुप्रयोग और प्रत्येक विधि का उपयोग कब करना है, इसके बारे में जानें।
सामान्य नैदानिक उपयोग में, "पीसीआर परीक्षण" और "आरटी-पीसीआर परीक्षण" का उपयोग कोविड-19 (COVID-19) परीक्षण के संदर्भ में परस्पर किया जाता है। वे एक ही प्रयोगशाला परख को संदर्भित करते हैं। तकनीकी रूप से, कोविड-19 (COVID-19) परीक्षण एक रियल-टाइम आरटी-पीसीआर (Real-Time RT-PCR) है— यह रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन (क्योंकि SARS-CoV-2 एक आरएनए वायरस है) और रियल-टाइम फ्लोरोसेंट डिटेक्शन का उपयोग करता है। जब पुणे में आपका डॉक्टर आपको "कोविड पीसीआर परीक्षण" के लिए संदर्भित करता है, तो प्रयोगशाला आरटी-पीसीआर (RT-PCR) करती है। आपकी रिपोर्ट पर मुद्रित सीटी (Ct) मान परख के रियल-टाइम घटक का एक मात्रात्मक आउटपुट है।
आरटी-पीसीआर (RT-PCR) परिणाम में सीटी (Ct) (साइकिल थ्रेशोल्ड) मान एक परिभाषित सिग्नल थ्रेशोल्ड से ऊपर लक्ष्य वायरल आरएनए (RNA) का पता लगाने के लिए आवश्यक प्रवर्धन चक्रों की संख्या को संदर्भित करता है। एक कम सीटी (Ct) मान— आमतौर पर 20 से नीचे— का अर्थ है कि वायरस का पता प्रवर्धन प्रक्रिया में बहुत जल्दी चला था, जो रोगी के नमूने में एक उच्च वायरल लोड का संकेत देता है। एक उच्च सीटी (Ct) मान— 30 और 35 के बीच— का अर्थ है कि वायरस का पता कई चक्रों के बाद ही चला था, जो एक कम वायरल लोड का संकेत देता है। आईसीएमआर (ICMR) दिशानिर्देश 35 से नीचे के सीटी (Ct) मान को सकारात्मक कोविड-19 (COVID-19) परिणाम मानते हैं। नैदानिक रूप से, सीटी (Ct) मान चिकित्सकों को बीमारी की गंभीरता और संक्रामक अवधि का आकलन करने में मदद करते हैं, हालांकि उन्हें हमेशा लक्षणों और नैदानिक प्रस्तुति के संदर्भ में व्याख्या की जानी चाहिए।
क्यूआरटी-पीसीआर (qRT-PCR) (क्वांटिटेटिव रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन पीसीआर - Quantitative Reverse Transcription PCR) रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन को रियल-टाइम मात्रात्मक पहचान के साथ जोड़ता है। यह अनिवार्य रूप से एक रियल-टाइम पीसीआर (Real-Time PCR) उपकरण पर फ्लोरोसेंट डिटेक्शन के साथ किया गया आरटी-पीसीआर (RT-PCR) है— जिससे आरएनए-से-सीडीएनए (RNA-to-cDNA) रूपांतरण और मात्राकरण दोनों एक ही, सतत प्रक्रिया में हो सकते हैं। मानक आरटी-पीसीआर (RT-PCR) आरएनए (RNA) की उपस्थिति को गुणात्मक रूप से (सकारात्मक या नकारात्मक) पता लगाता है; क्यूआरटी-पीसीआर (qRT-PCR) यह मापता है कि मूल नमूने में कितना आरएनए (RNA) मौजूद था, जिसे प्रति एमएल प्रतियों या सीटी (Ct) मान के रूप में व्यक्त किया जाता है। एचआईवी (HIV) वायरल लोड परीक्षण क्यूआरटी-पीसीआर (qRT-PCR) का एक सामान्य उदाहरण है— यह डॉक्टर को न केवल यह बताता है कि एचआईवी आरएनए (RNA) मौजूद है या नहीं, बल्कि रक्त में कितनी प्रतियां प्रसारित हो रही हैं, जो सीधे उपचार निर्णयों का मार्गदर्शन करता है।
भारत में आरटी-पीसीआर (RT-PCR) का उपयोग संक्रामक और आनुवंशिक स्थितियों की एक विस्तृत श्रृंखला का निदान करने के लिए किया जाता है। सबसे आम नैदानिक अनुप्रयोगों में शामिल हैं: कोविड-19 (COVID-19) (SARS-CoV-2 आरएनए - RNA का पता लगाना); एचआईवी (HIV) संक्रमण और वायरल लोड की निगरानी; तपेदिक (टीबी - TB) (जीनएक्सपर्ट टीबी पीसीआर - GeneXpert TB PCR, जो माइकोबैक्टीरियम ट्यूबरकुलोसिस डीएनए - Mycobacterium tuberculosis DNA का पता लगाता है); हेपेटाइटिस सी (एचसीवी आरएनए - HCV RNA पुष्टि और वायरल लोड); डेंगू बुखार (एंटीबॉडी विकसित होने से पहले प्रारंभिक निदान); इन्फ्लूएंजा ए, बी, और एच3एन2 सबटाइपिंग; चिकनगुनिया; लेप्टोस्पाइरोसिस; और काली खांसी (बोर्डेटेला पर्टुसिस - Bordetella pertussis)। ऑन्कोलॉजी में, आरटी-पीसीआर (RT-PCR) का उपयोग क्रोनिक मायलॉइड ल्यूकेमिया (बीसीआर-एबीएल - BCR-ABL) और कुछ स्तन कैंसर उपप्रकारों सहित कैंसर में जीन अभिव्यक्ति बायोमार्कर का पता लगाने के लिए किया जाता है। कोरोनावायरस संक्रमण के दीर्घकालिक प्रभावों पर हमारी मार्गदर्शिका चर्चा करती है कि आरटी-पीसीआर (RT-PCR) परिणाम— विशेष रूप से सीटी (Ct) मान— पोस्ट-कोविड निगरानी निर्णयों को कैसे प्रभावित करते हैं।
एक मानक RT-PCR टेस्ट को नमूना प्राप्त होने से परिणाम तक 4 से 8 घंटे लगते हैं, जो प्रयोगशाला के कार्यप्रवाह, बैच के आकार और टेस्ट को तत्काल या नियमित रूप से किया जाता है या नहीं, इस पर निर्भर करता है। वास्तविक आणविक प्रतिक्रिया — आरएनए निष्कर्षण, रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन और पीसीआर प्रवर्धन — में लगभग 2-3 घंटे लगते हैं। प्रशासनिक प्रसंस्करण, गुणवत्ता जांच और रिपोर्ट तैयार करना कुल टर्नअराउंड समय में इजाफा करता है। पुणे में NABL-साझेदार प्रयोगशालाओं में COVID-19 RT-PCR के परिणाम आमतौर पर नमूना संग्रह के 6-24 घंटे के भीतर रिपोर्ट किए जाते हैं। healthcare nt sickcare में, RT-PCR-आधारित टेस्ट के लिए घर से नमूना संग्रह औंध, बानेर, वकाड, कोथरुड, हडपसर और पुणे तथा पिंपरी-चिंचवड़ के आस-पास के क्षेत्रों में उपलब्ध है, जिसमें डिजिटल रिपोर्ट आपके पंजीकृत ईमेल पर भेजी जाती हैं।
healthcare nt sickcare, पुणे, महाराष्ट्र, भारत
सही पैथोलॉजी प्रयोगशाला चुनना आसान होना चाहिए। पुणे के निवासियों के लिए डिज़ाइन किए गए विश्वसनीय रक्त परीक्षण और निवारक स्वास्थ्य जांच पैकेजों का अन्वेषण करें।
अस्वीकरण
यह लेख केवल सामान्य स्वास्थ्य जागरूकता और शैक्षिक उद्देश्यों के लिए है। यह चिकित्सा सलाह या किसी योग्य पेशेवर से प्रयोगशाला या नैदानिक मार्गदर्शन का विकल्प नहीं है। RT-PCR और qPCR परीक्षण प्रोटोकॉल, परिणाम व्याख्या और नैदानिक अनुप्रयोग प्रयोगशालाओं और स्थितियों के बीच भिन्न हो सकते हैं - अपने परीक्षण परिणामों के लिए विशिष्ट मार्गदर्शन हेतु हमेशा अपने उपचार करने वाले चिकित्सक से सलाह लें। उपयोग की पूर्ण शर्तों के लिए, हमारी अस्वीकरण नीति देखें। सभी सामग्री कॉपीराइट healthcare nt sickcare। अनधिकृत पुनरुत्पादन सख्त वर्जित है। © healthcare nt sickcare और healthcarentsickcare.com, 2017–वर्तमान।