पीसीआर, आरटी-पीसीआर और क्यूपीसीआर लक्षित प्रवर्धन तकनीकों के बीच अंतर

पीसीआर (पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन) और क्यूपीसीआर (मात्रात्मक पीसीआर) के बीच मुख्य अंतर यह है:

पीसीआर

• लक्ष्य डीएनए अनुक्रम की उपस्थिति का पता लगाता है
• गुणात्मक परीक्षण (डीएनए की उपस्थिति या अनुपस्थिति)
• डीएनए के परिमाणीकरण की अनुमति नहीं देता

क्यूपीसीआर

• डीएनए सांद्रता को मापता है
• मात्रात्मक परीक्षण
• सटीक डीएनए स्तर या जीन अभिव्यक्ति को मापता है
• अधिक संवेदनशील और सटीक परिमाणीकरण

पीसीआर में, डीएनए अनुक्रम तेजी से प्रवर्धित होता जाता है जब तक कि अभिकर्मक समाप्त नहीं हो जाते, जिससे अनुक्रम का पता लगाने के लिए गुणात्मक सकारात्मक या नकारात्मक परिणाम प्राप्त होता है।

क्यूपीसीआर में, फ्लोरोसेंट टैग प्रत्येक प्रतिकृति चक्र के दौरान डीएनए की मात्रा निर्धारित करने की अनुमति देते हैं। परिणाम अनुक्रम उपस्थिति की गुणात्मक सकारात्मकता के बजाय सटीक सांद्रता है।

जबकि पीसीआर और क्यूपीसीआर दोनों ही लक्ष्य डीएनए को बढ़ाते हैं, क्यूपीसीआर तकनीक वास्तविक समय में प्रवर्धन प्रगति की निगरानी भी करती है। यह सटीक लक्ष्य डीएनए मात्रा निर्धारण की अनुमति देता है जो जीन अभिव्यक्ति विश्लेषण, सूक्ष्मजीव भार का पता लगाने आदि के लिए उपयोगी है, जिसमें सटीक मापे गए स्तरों की आवश्यकता होती है।

संक्षेप में, दोनों ही DNA को गुणा करते हैं, लेकिन qPCR एक साथ संवेदनशील परिमाणीकरण को भी सक्षम बनाता है, जो संख्यात्मक परिणामों की आवश्यकता वाले कुछ अनुप्रयोगों के लिए उपयोगी है।

रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन पॉलीमरेज़ चेन रिएक्शन (आरटी-पीसीआर) में शामिल मुख्य चरण हैं:

1. आरएनए निष्कर्षण : सबसे पहले, नमूने (कोशिकाओं, ऊतकों आदि) से आरएनए निकाला जाता है और शुद्ध किया जाता है। अच्छी गुणवत्ता वाला आरएनए महत्वपूर्ण है।
2. रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन : निकाले गए आरएनए को रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस नामक एंजाइम द्वारा पूरक डीएनए (सीडीएनए) में परिवर्तित किया जाता है।
3. प्रारंभिक विकृतीकरण : सीडीएनए नमूने को गर्म करके दोहरे स्ट्रैंड वाले डीएनए को एकल स्ट्रैंड में अलग किया जाता है।
4. प्राइमरों के साथ पीसीआर प्रवर्धन : बार-बार थर्मल साइक्लिंग अनुक्रम विशिष्ट प्राइमरों का उपयोग करके लक्ष्य सीडीएनए को तेजी से प्रवर्धित करने में मदद करता है।
5. अंतिम विस्तार: अंतिम विस्तारित किस्में अभिकर्मकों और इष्टतम तापमान की आपूर्ति करके पूरी की जाती हैं।
6. दृश्यावलोकन : प्रवर्धित पीसीआर उत्पादों को अंततः मात्रा निर्धारण और विश्लेषण से पहले पुष्टि के लिए एगरोज जेल वैद्युतकणसंचलन के माध्यम से देखा जाता है।

संक्षेप में, प्रमुख चरण इस प्रकार हैं:

1. आरएनए निष्कर्षण
2. आरएनए का सीडीएनए में रूपांतरण
3. लक्ष्य सीडीएनए का पीसीआर प्रवर्धन
4. दृश्य पहचान और परिमाणीकरण

इससे आर.एन.ए. की छोटी मात्रा का भी अध्ययन आर.टी.-पी.सी.आर. तकनीक का उपयोग करके सीडीएनए के रूप में प्रवर्धित करके किया जा सकता है।

प्रत्येक पीसीआर, आरटी-पीसीआर और क्यूपीसीआर पर किए जाने वाले सामान्य परीक्षण क्या हैं?

पीसीआर, आरटी-पीसीआर और क्यूपीसीआर तकनीकों का उपयोग करके किए जाने वाले कुछ सामान्य परीक्षण यहां दिए गए हैं:

पीसीआर (पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन)

• रोगज़नक़ का पता लगाना (बैक्टीरिया, वायरस)
• आनुवंशिक रोग परीक्षण
• डीएनए फिंगरप्रिंटिंग/फोरेंसिक
• आनुवंशिक संगतता परीक्षण
• डीएनए संशोधनों का पता लगाना

आरटी-पीसीआर (रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन पीसीआर)

• जीन अभिव्यक्ति प्रोफाइलिंग
• वायरल लोड का पता लगाना
• कैंसर बायोमार्कर विश्लेषण
• माइक्रोआरएनए विश्लेषण
• वायरल संक्रमण का निदान
• आरएनए हस्तक्षेप का सत्यापन

क्यूपीसीआर (मात्रात्मक पीसीआर)

• वायरल लोड परिमाणीकरण
• जीएमओ का पता लगाना/मात्रा का निर्धारण
• जीन अभिव्यक्ति स्तर विश्लेषण
• माइक्रोबियल का पता लगाना/मात्रा का निर्धारण
• प्रतिलिपि संख्या भिन्नता विश्लेषण
• सीडीएनए परिमाणीकरण
• बायोमार्कर सत्यापन

संक्षेप में, जबकि प्रवर्धन की अंतर्निहित तकनीक समान है, पीसीआर, आरटी-पीसीआर और क्यूपीसीआर को आवश्यकता के आधार पर विभिन्न प्रकार के गुणात्मक पता लगाने बनाम सटीक मात्रात्मक विश्लेषण परीक्षणों में लागू किया जाता है।

उच्च संवेदनशीलता के कारण डीएनए/आरएनए के सूक्ष्म अंशों को तेजी से गुणा किया जा सकता है, जिससे निदान से लेकर अनुसंधान तक कई क्षेत्रों में बेहतर परिशुद्धता और सटीकता प्राप्त होती है।

निष्कर्ष